[發(fā)明專利]一種海菜花種苗組培快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510040301.1
• 申請日: 2015-01-27
• 公開（公告）號: CN104604683A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐鳳鸞;黃寧珍;何金祥;趙健;付傳明;冼康華;仇碩;黃惠錦
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務(wù)所有限責任公司 45112
• 代理人: 楊雪梅

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含高蛋白的水生植物海菜花種苗組培快速繁殖方法。

背景技術(shù)

海菜花Ottelia?acuminata(Gagnep.)Dandy是一種多年生大型沉水植物，我國特有種，國家二級保護植物。海菜花能大量吸收水中的營養(yǎng)物質(zhì)，減少氮、磷含量，還可分泌一些化感物質(zhì)抑制藻類生長，因此在解決水體富營養(yǎng)化及水華爆發(fā)等生態(tài)問題中具有重要作用，被譽為凈化水質(zhì)的“試金石”。海菜花含有豐富的蛋白質(zhì)、鈣、磷等多種營養(yǎng)成分，是一種非常受歡迎的綠色蔬菜，同時也是產(chǎn)區(qū)人們發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)的主要飼料來源。此外，海菜花花期長、觀賞性好，還能形成“花—魚—鳥”的獨特立體生態(tài)景觀，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

然而，在自然條件下由于水流、底質(zhì)及動物取食等原因，萌發(fā)的海菜花種子幼苗很難成活；再加上其雌雄佛焰苞及花莖大多被采摘食用，又進一步減少了種子數(shù)量。而分株繁殖時，1株成年植株每年也只能分殖3～5株苗，繁殖系數(shù)相當?shù)停液２嘶ǖ那o極度短縮，植株成叢生狀，分株時容易受傷并難以成活。近年來由于濕地破壞及人類過渡采挖等因素的影響，海菜花種群數(shù)量急劇減少，已處于瀕危狀態(tài)，嚴重制約了海菜花的應(yīng)用。可見，與其它沉水植被一樣，海菜花的種苗快速規(guī)模化繁殖正是困擾其植被恢復(fù)，以及開發(fā)利用的關(guān)鍵所在。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)在種苗繁育中得到廣泛應(yīng)用，技術(shù)也相對成熟。利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖海菜花，可在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)良種苗，為海菜花種質(zhì)資源的保護及開發(fā)利用提供技術(shù)支撐，具有良好的應(yīng)用前景。目前，針對海菜花的研究多集中于生物學(xué)、生態(tài)學(xué)及分類學(xué)領(lǐng)域，而對于海菜花種苗組織培養(yǎng)技術(shù)的研究尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速獲得大量海菜花種苗的繁殖方法，具有繁殖速度快、種苗質(zhì)量好、可操作性強等特點，并克服了水生植物組織培養(yǎng)中外植體消毒滅菌困難的問題。

本發(fā)明以蛋白含量高、觀賞性好并具有水質(zhì)凈化功能的大型沉水植物海菜花為材料，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進行種苗快速繁殖研究，通過果實處理及消毒滅菌、種子萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)、芽繼代增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)及試管苗移栽研究，獲得海菜花種苗快速繁殖的方法，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明一種海菜花種苗組培快速繁殖方法，包括以下步驟：

（1）從野外采集朔果充分膨大、果皮呈深藍色或淺黃色、無病蟲的完整海菜花果實，去除果皮表面附著物，并用洗潔精擦洗干凈，后用100～200?mg/L的甲基托布津溶液浸泡0.3～1h，自來水沖洗干凈；在超凈工作臺上先用70～75%(v/v)酒精浸泡1～2?min，再用濃度為0.1～0.2%(w/v)升汞浸泡15～20?min，無菌水沖洗5～6遍，獲得無菌果實；

（2）將步驟（1）獲得的無菌果實用手術(shù)刀縱向切開，將種子接到萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成幼芽；

（3）以步驟（2）獲得的無菌幼芽為材料，去除胚根和葉片后，轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，獲得叢生芽；

（4）經(jīng)過增殖擴繁后，將植株高度達到4?cm的小苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得完整試管苗；

（5）將完整試管苗直接在水質(zhì)良好的水域中進行移栽定植；

其中，所述萌發(fā)培養(yǎng)基為：MS、6-BA?0.5～2.0?mg/L、NAA?0.1～0.5?mg/L、瓊脂4.5～6.0?g/L、蔗糖30?g/L，pH為5.8～6.2；

所述繼代增殖培養(yǎng)基為：改良MS、6-BA?1.0～2.0?mg/L、KT?0.5～1.0?mg/L、NAA?0.1～0.5?mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.5?g/L、椰子汁100～200?mg/L、蔗糖20?g/L、瓊脂4.5～6.0?g/L，pH為5.8～6.2；

所述生根培養(yǎng)基為：改良MS、NAA0.1～0.2?mg/L、蔗糖30?g/L、瓊脂4.5～6.0?g/L，pH為5.8～6.2。

所述培養(yǎng)基中，6-BA為6-芐氨基腺嘌呤；NAA為1-萘乙酸；KT為6-糠氨基嘌呤（激動素）。