[發明專利]伊文氏藍或其衍生物修飾的Exendin-4及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510039442.1
• 申請日: 2015-01-26
• 公開（公告）號: CN104650217B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 陳小元;朱雷;郎立新
• 申請（專利權）人: 莎穆（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/107;A61K38/22;A61K47/64;A61P3/10;A61P9/10
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 劉俊玲

1.一種Exendin-4衍生物，其特征在于：為伊文氏藍或其衍生物偶聯到CysEX4的C末端半胱氨酸巰基上獲得的衍生物，

所述CysEX4的氨基酸序列為：

His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-The-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Glu-Xaa16-Xaa17-Ala-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-IIe-Xaa24-Trp-Leu-Xaa27-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Cys-NH₂；其中：

Xaa2 是 Gly，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa10 是 Leu，Ala，Ser，He，Glu 或 Lys ；

Xaa12 是 Lys，Leu，Thr，Ser， Ile 或 Cys ；

Xaa13 是 Gln，Thr，Ala，Val，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa14 是 Met，Tyr，Thr，Ala，Ser，Ile 或 Lys ；

Xaa16 是 Glu，Lys，Ala，Ser，Leu，Trp 或 Thr ；

Xaa17 是 Glu，Asp，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa19 是 Val，Cys，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa20 是 Arg，Thr，Tyr，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa21 是 Leu，Thr，Ala，Asp，Glu，His 或 Lys ；

Xaa24 是 Glu，Leu，Thr，Ala，Ser，Lys 或 Ile ；

Xaa27 是 Lys，Ala，Ser，Leu，Thr，或Ile ；

Xaa28 是 Asp，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa30 是 Gly，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Arg ；

Xaa31 是 Pro，Val，Ser，Ala，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa32 是 Ser，Thr，Glu， Asp，Lys 或 Ile ；

Xaa33 是 Thr，Ser，Ala，Met，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa34 是 Gly，Thr，Met，Ser，He，Leu 或 Lys ；

Xaa35 是 Ala，Thr， Glu，Leu，Ile 或 Phe ；

Xaa36 是 Pro，Ala，Thr，Ser，Leu，Ile 或 Cys ；

Xaa37 是 Pro，Thr，Ser，Ala，His，Lys 或 Ile ；

Xaa38 是 Pro，Thr，Val，Ser，Leu，Lys 或 Ile ；

Xaa39 是 Ser，Tyr，Ala，Leu， Ile 或 Lys ；

所述CysEX4通過化學合成獲得或通過基因工程重組表達的方式獲得；

所述伊文氏藍或其衍生物為伊文氏藍琥珀酰亞胺基丙酸酯、伊文氏藍N-羥基琥珀酰亞胺、伊文氏藍醛、伊文氏藍馬來酰亞胺、伊文氏藍吡啶基二硫酚或伊文氏藍碘代乙酰基；

所述Exendin-4衍生物在保持原有Exendin-4生物活性的基礎上，具備更長的體內半衰期。

2.一種制備權利要求1所述的Exendin-4衍生物的方法，其特征在于：其步驟如下：

（1）含有還原劑的醋酸鈉溶液中CysEX4與伊文氏藍或其衍生物偶聯反應；

（2）在避光條件下，4℃，反應2小時，儲存步驟（1）的反應混合物；

（3）從反應混合物中移除未反應物質并從中分離和提純伊文氏藍或其衍生物單獨修飾的CysEX4。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，在伊文氏藍或其衍生物與CysEX4偶聯反應中，采用的還原劑為NaCNBH₃。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，伊文氏藍或其衍生物與CysEX4的摩爾比為1:1。