[發(fā)明專利]一種無創(chuàng)制作肺纖維化動(dòng)物模型的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510038225.0
• 申請(qǐng)日: 2015-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN104605958A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫增濤;鄭兆曄;廉富;楊曉敏;閆博;劉恩順;祁海燕;李美鳳;封繼宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61D7/00
• 分類號(hào): A61D7/00
• 代理公司: 四川君士達(dá)律師事務(wù)所 51216
• 代理人: 芶忠義

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種無創(chuàng)制作肺纖維化動(dòng)物模型的方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)有的構(gòu)建肺纖維化動(dòng)物模型的方法有很多，主要包括：氣管切開術(shù)、氣管插管、額鏡引導(dǎo)灌注、腹腔注射或靜脈滴注化學(xué)藥物法、輻射法、口咽部給藥法。

造模方法有很多，但是各自都美中不足，存在或多或少的缺點(diǎn)。氣管切開對(duì)標(biāo)本鼠的外源性創(chuàng)傷大操作繁雜，對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的影響較大，且實(shí)施操作耗費(fèi)時(shí)間；氣管插管或額鏡引導(dǎo)方法存在操作盲目性大、準(zhǔn)確性差、成功率低、用時(shí)長(zhǎng)等缺陷。

腹腔注射或靜脈滴注化學(xué)藥物等方法主要是腹腔或者靜脈給予博來霉素法，腹腔注射博來霉素法，可以減輕因手術(shù)操作熟練程度的不同造成的纖維化程度不同，但由于造模需要的博來霉素總劑量較大，費(fèi)用高，且藥物注射次數(shù)較多，因此國(guó)內(nèi)應(yīng)用受到一定限制。靜脈給藥的最大優(yōu)點(diǎn)是它更接近人類給藥的基本途徑，但是模型形成晚。

輻射法：選用對(duì)輻射敏感的動(dòng)物為構(gòu)建肺纖維化模型帶來了便利，且特定近交品系動(dòng)物具有輻射敏感性這一特點(diǎn)有利于肺纖維化與該動(dòng)物遺傳特性之間的相關(guān)性的研究，該動(dòng)物模型的缺點(diǎn)是形成肺纖維化的時(shí)間較長(zhǎng)，且用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的費(fèi)用增高。

口咽部給藥主要通過氣霧給藥，一般情況下，除滿足藥物霧化后粒徑要求外，選擇合適的霧化發(fā)生裝置和動(dòng)物霧化吸入裝置同樣重要，藥液用量小常用壓縮式霧化器，若用量大則用超聲霧化器；而吸入裝置應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物選擇不同型號(hào)的面罩或噴霧吸嘴。目前常用的是動(dòng)式吸入裝置，應(yīng)選擇對(duì)供試品吸附較少，氣溶膠發(fā)生能力強(qiáng)、密封性好、易于清洗的裝置，并確保能快速達(dá)到試驗(yàn)所需濃度并在試驗(yàn)過程中保持藥物濃度穩(wěn)定性。藥物仍須保持分散均勻，不形成結(jié)塊。所以從霧化粒徑之外，裝置要求較多，并難以計(jì)算以及掌握吸入量的多少，容易造成給藥量不均。

針對(duì)上述現(xiàn)有的操作技術(shù)，目前，需要一種操作方便，成功率高，損傷小且成本低廉的大鼠用氣管內(nèi)給藥方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明提出了一種無創(chuàng)制作肺纖維化動(dòng)物模型的方法。其技術(shù)方案如下：

一種無創(chuàng)制作肺纖維化動(dòng)物模型的方法，包括以下步驟：

采用內(nèi)窺鏡引導(dǎo)下氣管內(nèi)灌注的滴注菌液方式，設(shè)備采用鼻0度4#硬式內(nèi)窺鏡、氙燈冷光源及松下KS-822攝錄監(jiān)視系統(tǒng)；

將大鼠置于直徑為26cm的干燥器內(nèi)乙醚麻醉，麻醉滿意后迅速將鼠從麻醉器中取出，呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上；

兩名操作者并排位于鼠頭頂方向，首先助手以左手持鼠麻醉喉鏡，自鼠上唇齒伸入口腔、提壓鼠舌，伸至鼠會(huì)厭緣處時(shí)提拉鼠舌根，以右手持牽拉套圈，套住鼠上列長(zhǎng)尖牙門齒，左右手同時(shí)相反方向上下牽拉舌根與長(zhǎng)尖牙門齒，使鼠自唇齒至喉部間上呼吸暢通暴露聲門區(qū)域，此時(shí)主操作者以左手持0度硬式內(nèi)窺鏡，右手持7號(hào)長(zhǎng)針注射器，內(nèi)裝定量造模所用肺炎鏈球菌菌懸液，在監(jiān)視器顯示引導(dǎo)下將7號(hào)長(zhǎng)注射針插入氣管內(nèi)，并深入聲門下15～20mm，此時(shí)觀察鼠的聲帶活動(dòng)情況，當(dāng)雙側(cè)聲帶由內(nèi)收狀向外展?fàn)钭兓瘯r(shí)，迅速推注藥物博來霉素200μl入氣管內(nèi)，使藥物隨吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，推注完畢后，將鼠板迅速立起鼠頭在上左右翻轉(zhuǎn)15～20秒，此目的是利用體位及重力作用，使藥物充分能夠達(dá)到細(xì)支氣管以提高造模藥物肺部覆蓋面從暴露氣道至推注藥物完成時(shí)間用20～30秒；空白組不做處理，鹽水對(duì)照組注入同等量的無菌生理鹽水；每7天滴入一次，共2次；

解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，鼠復(fù)蘇時(shí)間30～60秒，然后置于恒溫動(dòng)物房飼養(yǎng)；接種后每日觀察其活動(dòng)、取食、精神的一般情況，記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

進(jìn)一步優(yōu)選，所述博來霉素的濃度為2.5mg/ml。

本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明造模方法采用無創(chuàng)氣管內(nèi)滴入博來霉素法構(gòu)建肺纖維化動(dòng)物模型，改方法你能夠模擬臨床肺纖維化的形成過程，其操作簡(jiǎn)便、快捷，減少氣管切開等對(duì)動(dòng)物造車的外源性損傷，且能夠保證藥物完全進(jìn)入氣管內(nèi)，也縮短了造模時(shí)間。該方法既能保證藥物的不浪費(fèi)，也能縮短造模時(shí)間，從經(jīng)濟(jì)學(xué)角度考慮也減少了造模成本。

附圖說明請(qǐng)

圖1為空白組HE染色(400倍)；

圖2為空白組Masson染色(400倍)；

圖3為模型組第21天HE染色(400倍)；

圖4為模型組第21天Masson染色(400倍)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。