[發(fā)明專利]一種基于金納米簇模擬酶試劑盒及其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510037912.0
• 申請日: 2015-01-26
• 公開（公告）號: CN104502614A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃昊文;趙倩;陳甚娜;張凌陽;周媛;劉蘭芳
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南科技大學(xué)
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/574
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務(wù)所(普通合伙)43108
• 代理人: 宋向紅

1.一種基于金納米簇模擬酶試劑盒，其特征在于包括如下物質(zhì)：96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲狀腺激素抗體或者乳腺癌抗體、金納米簇標(biāo)記的T3甲狀腺激素抗體或者金納米簇標(biāo)記的乳腺癌抗體、樣品稀釋液、PBS緩沖溶液、終止緩沖溶液、顯色底物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于金納米簇模擬酶試劑盒，其特征在于：所述金納米簇標(biāo)記的T3甲狀腺激素抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將T3甲狀腺激素抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應(yīng)2小時，透析處理24小時所得；所述金納米簇標(biāo)記的乳腺癌抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將乳腺癌抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應(yīng)2小時，透析處理24小時所得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于金納米簇模擬酶試劑盒，其特征在于：所述樣品稀釋液是：將T3甲狀腺激素溶液首先用NaOH溶液進行稀釋之后，再用pH＝7.2—7.4、濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液稀釋成濃度為2×10^-12至2×10^-16mg/mL的溶液；或者是：將乳腺癌抗原用pH＝7.2—7.4、濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液稀釋成濃度為7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于金納米簇模擬酶試劑盒，其特征在于：所述顯色底物是以濃度為4mmol/L的檸檬酸三鈉溶液、濃度為320μmol/L的雙氧水溶液和濃度為2mmol/L的氯金酸溶液所制備的金納米顆粒溶液，三種溶液的體積比為1：1：1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于金納米簇模擬酶試劑盒，其特征在于：所述終止緩沖溶液為濃度為1mg/mL的BSA溶液。

6.一種如權(quán)利要求1所述基于金納米簇模擬酶試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將T3甲狀腺激素抗體或者乳腺癌抗體接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4℃下反應(yīng)過夜，三次PBS緩沖溶液沖洗后，加入終止緩沖溶液即濃度為1mg/mL的BSA溶液反應(yīng)1小時；

(2)三次PBS緩沖溶液沖洗后，再在不同微孔板中加入各種濃度的樣品稀釋液，即稀釋成濃度為2×10^-12至2×10^-16mg/mL的T3甲狀腺激素溶液或者稀釋成濃度為7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的乳腺癌抗原溶液，反應(yīng)3小時；

(3)三次PBS緩沖溶液沖洗后，再對應(yīng)加入金納米簇標(biāo)記的T3甲狀腺激素抗體或者金納米簇標(biāo)記的乳腺癌抗體，反應(yīng)3小時；

(4)再用PBS緩沖溶液沖洗三次，然后加入檸檬酸三鈉溶液以及雙氧水溶液，反應(yīng)40分鐘后，加入氯金酸溶液；30分鐘后，觀察不同微孔板中溶液顏色的變化，與對比實驗中生成的顯色底物金納米顆粒溶液即檸檬酸三鈉溶液、雙氧水溶液和氯金酸溶液所制備的金納米顆粒溶液的顏色進行對比；并用紫外分光光度計在波長450nm-700nm的范圍內(nèi)測其譜圖的變化，并記錄不同濃度的樣品稀釋液在波長550nm處的吸光度值，與對比實驗中生成的顯色底物金納米顆粒溶液的吸光度值進行對比，即能得到檢測結(jié)果，實現(xiàn)T3甲狀腺激素以及乳腺癌抗原的快速檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述基于金納米簇模擬酶試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(3)所述金納米簇標(biāo)記的T3甲狀腺激素抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將T3甲狀腺激素抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應(yīng)2小時，透析處理24小時所得；步驟(3)所述金納米簇標(biāo)記的乳腺癌抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將乳腺癌抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應(yīng)2小時，透析處理24小時所得。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述基于金納米簇模擬酶試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(4)所述加入檸檬酸三鈉溶液、雙氧水溶液以及氯金酸溶液中，檸檬酸三鈉溶液濃度為4mmol/L，雙氧水溶液濃度為320μmol/L，氯金酸溶液濃度為2mmol/L，三種溶液的體積比為1：1：1；步驟(4)中所述對比實驗中生成的顯色底物金納米顆粒溶液是：以濃度為4mmol/L的檸檬酸三鈉溶液、濃度為320μmol/L的雙氧水溶液和濃度為2mmol/L的氯金酸溶液所制備的金納米顆粒溶液，三種溶液的體積比為1：1：1。