[發(fā)明專利]一種基于金納米簇模擬酶試劑盒及其制備方法及應用

有效

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• 申請日: 2015-01-26
• 公開（公告）號: CN104502614A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發(fā)明（設計）人: 黃昊文;趙倩;陳甚娜;張凌陽;周媛;劉蘭芳
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/574
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務所(普通合伙)43108
• 代理人: 宋向紅

技術領域

本發(fā)明屬于納米生物傳感以及生物檢測技術領域，具體涉及一種基于金納米簇模擬酶試劑盒的制備以及應用于T3甲狀腺激素及乳腺癌抗原的快速檢測方法。

背景技術

目前，乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7-10％，已成為威脅婦女健康的主要病因。由于癌癥早期癥狀不明顯，很難被及早發(fā)現(xiàn)，并且嚴重危害婦女健康，因而癌癥的早期診斷和治療仍是亟待解決的最重要的醫(yī)學問題之一。T3甲狀腺激素是維持機體正常代謝，促進生長發(fā)育所必需的重要激素。甲狀腺激素主要是促進蛋白質(zhì)合成，特別是使骨、骨骼肌、肝等蛋白質(zhì)合成明顯增加，這對幼年時的生長、發(fā)育具有重要意義。而甲狀腺激素的過多或過少都會直接危害人體健康，促使疾病的產(chǎn)生。

金納米簇由于具有熒光強度高、強抗光漂白的能力、良好生物兼容性、低毒性和好的熒光穩(wěn)定性等優(yōu)點而得到廣泛關注。研究表明金納米簇具有一定的催化能力，在金納米簇的存在下，H₂O₂能快速氧化3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)使其變藍，基于此，我們建立一種雙模檢測的新方法，既可利用顏色變化對雙氧水進行可視化半定量檢測，又可以通過吸光度的大小對雙氧水的準確含量進行定量檢測。同樣，金納米顆粒由于制備簡單方便、性質(zhì)較穩(wěn)定、生物相容性好等優(yōu)點被廣泛用于生命分析化學中。由氯金酸通過還原法可以方便地制備出各種不同粒徑的納米金顆粒，其顏色依直徑大小而呈紅色至藍色。同時，金納米顆粒隨直徑的變化呈現(xiàn)出不同的顏色，其紫外吸收峰也會相應發(fā)生變化。在金納米顆粒的制備中，雙氧水溶液是重要的反應物之一，而金納米簇能催化金納米顆粒制備條件中的雙氧水使其分解，之后雙氧水的濃度發(fā)生改變，金納米顆粒就會呈現(xiàn)出不同的顏色，從紅色、紫紅色至藍色。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種基于金納米簇模擬酶試劑盒，它快速準確的檢測T3甲狀腺激素以及乳腺癌抗原，使金納米簇成功取代傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附反應中的生物酶，顯著提高檢測的靈敏度以及穩(wěn)定性。

本發(fā)明基于金納米簇模擬酶試劑盒，它包括如下物質(zhì)：96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲狀腺激素抗體或者乳腺癌抗體、金納米簇標記的T3甲狀腺激素抗體或者金納米簇標記的乳腺癌抗體、樣品稀釋液、PBS緩沖溶液、終止緩沖溶液、顯色底物。

具體的，所述金納米簇標記的T3甲狀腺激素抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將T3甲狀腺激素抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應2小時，透析處理24小時所得；所述金納米簇標記的乳腺癌抗體是：使用活化劑EDC和NHS對金納米簇進行活化之后，將乳腺癌抗體加入到活化后的金納米簇溶液中，反應2小時，透析處理24小時所得。

具體的，所述樣品稀釋液是：將T3甲狀腺激素溶液首先用NaOH溶液進行稀釋之后，再用pH＝7.2—7.4、濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液稀釋成濃度為2×10^-12至2×10^-16mg/mL的溶液；或者是：將乳腺癌抗原用pH＝7.2—7.4、濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液稀釋成濃度為7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的溶液。

具體的，所述顯色底物是以濃度為4mmol/L的檸檬酸三鈉溶液、濃度為320μmol/L的雙氧水溶液和濃度為2mmol/L的氯金酸溶液所制備的金納米顆粒溶液，三種溶液的體積比為1：1：1。

具體的，所述終止緩沖溶液為濃度為1mg/mL的BSA溶液。

本發(fā)明的目的之二在于提供上述基于金納米簇模擬酶試劑盒的制備方法，它包括如下步驟：

(1)將T3甲狀腺激素抗體或者乳腺癌抗體接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4℃下反應過夜，三次PBS緩沖溶液沖洗后，加入終止緩沖溶液即濃度為1mg/mL的BSA溶液反應1小時；

(2)三次PBS緩沖溶液沖洗后，再在不同微孔板中加入各種濃度的樣品稀釋液，即稀釋成濃度為2×10^-12至2×10^-16mg/mL的T3甲狀腺激素溶液或者稀釋成濃度為7.52×10^-9至7.52×10^-14U/mL的乳腺癌抗原溶液，反應3小時；

(3)三次PBS緩沖溶液沖洗后，再對應加入金納米簇標記的T3甲狀腺激素抗體或者金納米簇標記的乳腺癌抗體，反應3小時；