[發明專利]重組釀酒酵母表達HBsAg的制備工藝及其分離純化工藝、HBsAg和乙肝疫苗

在審

• 申請號: 201510036934.5
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104628830A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 梁全;劉海濤;甘建輝;朱征宇;饒洪沖
• 申請（專利權）人: 深圳康泰生物制品股份有限公司
• 主分類號: C07K14/02
• 分類號: C07K14/02;A61K39/29;A61P31/20
• 代理公司: 深圳市盈方知識產權事務所(普通合伙) 44303
• 代理人: 楊賢

1.一種重組釀酒酵母表達HBsAg的分離純化工藝，包括有：

細胞破碎步驟，將經過發酵后提取的酵母細胞供入高壓勻漿器內，在15000±1500PSIG壓力下對其進行細胞破碎；

純化步驟，對破碎后的料液進行純化，制備HBsAg原液；

其特征在于，在所述細胞破碎步驟后、純化步驟之前還包括：

料液加熱步驟，對破碎后的料液進行加熱操作，使其溫度上升到50-80℃后，再將其降溫到2～8℃。

2.如權利要求1所述的分離純化工藝，其特征在于，在所述料液加熱步驟中，使其溫度上升到60-80℃。

3.如權利要求2所述的分離純化工藝，其特征在于，在所述料液加熱步驟中，使其溫度上升到60-70℃。

4.如權利要求3所述的分離純化工藝，其特征在于，在所述料液加熱步驟中，使其溫度上升到65±1℃。

5.如權利要求1-4中任一項所述的分離純化工藝，其特征在于，在所述料液加熱步驟中，通過在套設于所述勻漿器外部的夾套中傳遞傳熱介質，對所述勻漿器內經細胞破碎后的料液進行加熱。

6.如權利要求5所述的分離純化工藝，其特征在于，所述夾套中傳熱介質的傳遞方向與勻漿器內料液的流動方向相反。

7.如權利要求5所述的分離純化工藝，其特征在于，在所述細胞破碎步驟之前包括：

冷凍懸液融化步驟，將經過發酵后提取并冷凍保存的酵母細胞懸液從冷凍保存裝置中轉移到溫度穩定在26±1℃的水浴鍋內，至其融化完成；

所述提純步驟包括：

澄清抗原制備步驟，除去在所述勻漿器破碎并加熱后的料液中的酵母菌碎片后，通過加入硅膠380吸附目標抗原，并通過引入硼酸，將抗原由硅膠上解吸附，收集合并洗脫液，制備成澄清抗原；

原液制備步驟，將所述澄清抗原進一步用疏水色譜法純化HBsAg，用硫氰酸鹽處理，用磷酸鹽緩沖液稀釋，除菌過濾后即為原液。

8.一種重組釀酒酵母表達HBsAg的制備工藝，包括發酵步驟和分離純化步驟，其特征在于，所述分離純化步驟采用如權利要求1-7中任一項所述的分離純化工藝。

9.一種重組釀酒酵母表達的HBsAg，其特征在于：該HBsAg采用如權利要求8所述的工藝生產制得。

10.一種乙肝疫苗，其特征在于：該乙肝疫苗的活性成分包括有如權利要求9所述的重組釀酒酵母表達的HBsAg。