[發明專利]一種禽用多聯特異性卵黃抗體及轉移因子的制備方法有效

申請號：	201510036409.3	申請日：	2015-01-24
公開（公告）號：	CN104606675B	公開（公告）日：	2019-08-30
發明（設計）人：	黃威權;趙鋒;任敏;朱秋融;呂葆真;劉方	申請（專利權）人：	深圳金石邦信股權投資基金管理有限公司
主分類號：	A61K39/42	分類號：	A61K39/42;A61K39/40;A61P31/04;A61P31/14;A61P31/20;A61P33/02;A61K35/57;A61K38/19
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摘要：
搜索關鍵詞：	種禽用多聯特異性卵黃抗體轉移因子制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于卵黃抗體制備技術領域，具體涉及一種禽用多聯特異性卵黃抗體及轉移因子的制備方法。

背景技術

在哺乳動物，轉移因子和抗體主要富集在淋巴組織、循環血、胎盤及初乳中，哺乳動物的后代通過胎盤和初乳獲得和繼承母體的免疫防御能力，進而逐漸建立自身的免疫防御系統。在禽類，轉移因子和抗體主要富集于卵黃，通過卵黃把母體的免疫防御能力傳遞給它們的后代。因此，禽類的卵黃是人工提取卵黃抗體和卵黃轉移因子的最佳物質。轉移因子和抗體可用以防病治病是早已被人們所共識，與傳統的化學藥物及抗生素比較，它們的優點是無毒副作用、無藥物殘留，也不會通過生物鏈損害人類，是一種節能環保、安全有效的防治手段。卵黃抗體除了具有與哺乳動物產生的抗體相同的功能外，還具有比哺乳動物抗體更優越的特性，它耐酸、耐堿、耐高溫，便于貯存和運輸，它能抵抗胃酸的破壞，所以注射和口服效果均很好。制備卵黃抗體比制備哺乳動物抗體也有更多優越性。制備卵黃抗體不需殺生、只需取高免雞蛋，取材方便、成本低、產量高、質量優、無菌化處理較方便，所以用卵黃抗體和卵黃轉移因子防病治病，是一條優選免疫防疫途徑。

迄今，禽用特異性卵黃抗體和卵黃轉移因子及制備方面的專利報道較多，但多數是單一疾病的特異性卵黃抗體及卵黃轉移因子，2～3聯特異性卵黃抗體及卵黃轉移因子有少量報道，4聯以上特異性卵黃抗體及卵黃轉移因的專利未見報道。現有的專利中，特異性轉移因子和特異性卵黃抗體都是單獨制備，未見采用同一工藝同時生產卵黃抗體和卵黃轉移因子的報道。在制備工藝方面，一般采用反復凍融和研磨法破碎卵黃組織細胞，這種方法費時、費力，難于工業化生產。在轉移因子分離提取方面，一般都采用透析法進行提取，這種方法需用透析袋，在4℃無菌蒸餾水中進行，生產周期需要48h甚至更長，也難以進行工業化生產。

發明內容

本發明針對現有技術存在的缺陷，提出了一種禽用多聯特異性卵黃抗體及轉移因子的制備方法，采用同一工藝流程同時制備出特異性卵黃抗體和卵黃轉移因子，達到節能、減排、擴能、增效的目的。

本發明具體通過以下技術方案實現：

一種禽用多聯特異性卵黃抗體及轉移因子的制備方法，具體包括以下步驟：

1)將禽類疾病的疫苗通過腿部或翅下肌注方法，聯合免疫產蛋雞，第一次免疫后7～10d，進行第二次加強免疫，第二次免疫后5～7d，收集含有免疫抗體的雞蛋；

2)連續收集高免產蛋雞的雞蛋，每隔一個月加強免疫一次，再繼續收集雞蛋，直到產蛋雞被淘汰；

3)將收集的雞蛋清洗，放入70％酒精浸泡10min，晾干后分離蛋黃；

4)用高壓均質機在60Pa條件下進行卵黃組織破碎，加蒸餾水后攪拌均勻；

5)調節卵黃溶液的PH，離心去除沉淀脂蛋白，收取上清液；

6)上清液經壓力微孔過濾進一步除去脂蛋白和脂肪，收取濾液；

7)將以上濾液經超濾器進行超濾，收集被截留的液體為特異性卵黃抗體粗制品，濾液為多聯特異性卵黃轉移因子生物制品；

8)取卵黃抗體粗提液中加冷酒精，使卵黃抗體粗提液質量濃度為50～60％，充分攪拌使其混濁沉淀，在4000r/min離心20～30min，收集沉淀物；