[發(fā)明專利]一種禽用多聯(lián)特異性卵黃抗體及轉(zhuǎn)移因子的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510036409.3
• 申請(qǐng)日: 2015-01-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104606675B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃威權(quán);趙鋒;任敏;朱秋融;呂葆真;劉方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳金石邦信股權(quán)投資基金管理有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/42
• 分類號(hào): A61K39/42;A61K39/40;A61P31/04;A61P31/14;A61P31/20;A61P33/02;A61K35/57;A61K38/19
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種禽用多聯(lián)特異性卵黃抗體及轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

1)將禽類疾病的疫苗通過(guò)腿部或翅下肌注方法，聯(lián)合免疫產(chǎn)蛋雞，第一次免疫后7～10d，進(jìn)行第二次加強(qiáng)免疫，第二次免疫后5～7d，收集含有免疫抗體的雞蛋；

2)連續(xù)收集高免產(chǎn)蛋雞的雞蛋，每隔一個(gè)月加強(qiáng)免疫一次，再繼續(xù)收集雞蛋，直到產(chǎn)蛋雞被淘汰；

3)將收集的雞蛋清洗，放入70％酒精浸泡10min，晾干后分離蛋黃；

4)用高壓均質(zhì)機(jī)在60Pa條件下進(jìn)行卵黃組織破碎，加蒸餾水后攪拌均勻；

5)調(diào)節(jié)卵黃溶液的PH，離心去除沉淀脂蛋白，收取上清液；

6)上清液經(jīng)壓力微孔過(guò)濾進(jìn)一步除去脂蛋白和脂肪，收取濾液；

7)將以上濾液經(jīng)超濾器進(jìn)行超濾，收集被截留的液體為特異性卵黃抗體粗制品，濾液為多聯(lián)特異性卵黃轉(zhuǎn)移因子生物制品；

8)取卵黃抗體粗提液中加冷酒精，使卵黃抗體粗提液質(zhì)量濃度為50～60％，充分?jǐn)嚢枋蛊浠鞚岢恋恚?000r/min離心20～30min，收集沉淀物；

9)加蒸餾水恢復(fù)到所取卵黃抗體粗提液體積，然后加冷酒精使其濃度達(dá)到25～30％，充分?jǐn)嚢枋蛊浠鞚岢恋恚?000r/min離心20～30min，收集沉淀物，此過(guò)程重復(fù)兩次；

10)收取沉淀物，加適量蒸餾水使其沉淀物溶解或在37℃溫箱烤干，即為精制多聯(lián)特異性卵黃抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的禽類疾病的疫苗為防治禽流感、新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊炎、雞球蟲(chóng)病、雞白痢、鴨瘟、鴨肝炎、雞支原體病或雞大腸桿菌病中一種或多種混合疫苗。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的含有免疫抗體的雞蛋為檢測(cè)得到抗體效價(jià)大于1×10^-4的雞蛋。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中破碎蛋黃組織與蒸餾水的體積比為1:10～30。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(5)具體為使用鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)卵黃溶液的PH為5.4～6.0，在3500～4000r/min離心機(jī)離心20～30min，去除沉淀脂蛋白，收取上清液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(6)所述的壓力微孔過(guò)濾孔徑為0.22μm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟(7)中超濾膜截留分子量為10000Da。