[發明專利]轉基因苜蓿草J101品系特異性環介導等溫擴增檢測用引物及檢測方法和應用

有效

• 申請號: 201510034609.5
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104745685B
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 劉二龍;呂英姿;盧麗;蔣湘;樊武疆;姚柏輝;王定國;蘇彩珠;唐婕;林惠嬌;鄭高彬;林學勤;符其嬌;秦焯敏
• 申請（專利權）人: 黃埔出入境檢驗檢疫局綜合技術服務中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 任重

1.一組轉基因苜蓿草J101品系特異性環介導等溫擴增檢測用引物，其特征在于，所述引物為F3、B3、FIP、BIP、LF和LB，所述引物的序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.權利要求1所述轉基因苜蓿草J101品系特異性環介導等溫擴增檢測用引物在鑒別轉基因苜蓿草J101品系方面的應用，其特征在于，所述鑒別是從常見檢疫農作物中鑒別出轉基因苜蓿草J101品系，所述常見檢疫農作物為轉基因苜蓿草J101品系、轉基因玉米品系MIR162、轉基因玉米品系89034、轉基因玉米品系BT11、轉基因大米cry IA(a/b)、非轉基因油菜籽、非轉基因小麥或非轉基因大葉苜蓿。

3.一種轉基因苜蓿草J101品系特異性檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.提取DNA作為反應的模板；

S2.采用權利要求1所述引物F3、B3、FIP、BIP、LF和LB進行環介導等溫擴增檢測，根據檢測結果進行判斷；

其中，S2步驟所述環介導等溫擴增檢測的反應體系為25μL： 10×Thermopol buffer2.5 μL、10μM 的F3和10μM 的B3各0.5μL、40μM 的FIP和40μM 的BIP各1μL、40μM 的LF和40μM 的LB各0.5μL、10 mM 的dNTPs 4μL 、100 mM的 MgSO₄ 1μL、8 U/μL 的Bst DNA polymerase 1 μL、Template DNA1μL 和11.5μL ddH₂O；

S2步驟所述檢測的反應程序為：63℃恒溫反應60min，85℃加熱2min使酶失活，反應即結束；

根據檢測結果進行判斷的方法為：方法一：根據顏色變化進行結果判斷：向反應終體系加入0.2μL SYBR green I，1min觀察結果，陽性反應呈現黃綠色，而陰性的反應保持橙色； 或者，方法二：電泳檢測判斷：經過1.5%瓊脂糖電泳檢測，陽性反應的產物呈梯形條帶，陰性反應沒有梯形擴增條帶出現。

4.權利要求3所述轉基因苜蓿草J101品系特異性檢測方法的應用，其特征在于，應用于從常見檢疫農作物中鑒別出轉基因苜蓿草J101品系，所述常見檢疫農作物為轉基因苜蓿草J101品系、轉基因玉米品系MIR162、轉基因玉米品系89034、轉基因玉米品系BT11、轉基因大米cry IA(a/b)、非轉基因油菜籽、非轉基因小麥或非轉基因大葉苜蓿。