[發明專利]一種超級泰樂菌素的提純方法

有效

• 申請號: 201510034280.2
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104610403B
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 張國棟;吳家鑫;張傳良;徐金雷;張剛;王大旭;齊鵬;鄭應華;趙梅仙;葛辛玫;馬佳穎;宋敏;張淼
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙)11382
• 代理人: 張偉,師琦

技術領域

本發明屬于抗生素純化領域，主要涉及抗生素超級泰樂菌素的提純技術。

背景技術

超級泰樂菌素，化學名為3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素，為畜禽專用抗生素，結構式如下所示。超級泰樂菌素是泰樂菌素經耐熱鏈霉菌(Streptomyces thermotolerans)生物轉化，在3位乙酰化和4”位異戊酰化得到的新型大環內酯類抗生素，因其化學結構發生變化使其在抗菌譜、抗菌活性、耐藥性、化學穩定性、口服吸收性和血藥濃度等方面與泰樂菌素相比較具有明顯的優勢。

中國專利CN101381756A公開了一種利用酸提堿沉二次結晶的方法提純超級泰樂菌素的方法，該方法得到的超級泰樂菌素純度僅為81-83％，純度較低。中國專利CN102659882A公布的酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素(泰萬菌素)的提純方法，其得到的泰萬菌素純度最高也僅為92.1％。上述兩種方法得到的無論是超級泰樂菌素還是泰萬菌素，其純度都較低，難以滿足當前的需要。

因此，目前本領域需要提供一種可以制得高純度超級泰樂菌素的提純方法。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的一個目的是提供一種利用硅膠層析純化超級泰樂菌素的新方法，以克服現有超級泰樂菌素提純工藝制得的產品純度過低的問題。

本發明的另一個目的是提供采用該新方法制得的超級泰樂菌素。

本發明的目的通過如下技術解決方案實現。

一方面，本發明提供一種3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素的提純方法，所述提純方法包括：

以柱層層析硅膠為分離介質，以下述物質組成的混合液為洗脫液，對3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品進行純化：1)石油醚；2)乙酸乙酯和/或乙酸丁酯；和3)二乙胺、三乙胺和N,N-二異丙基乙基胺中的一種或多種。

根據本發明的具體實施方案，所述3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品是發酵生產得到的3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品，該產品是利用耐熱鏈霉菌(Streptomyces thermotolerans)對泰樂菌素的3-OH和4”-OH位置進行選擇性地酰化修飾得到。

具體而言，本發明的提純方法包括以下步驟：

(1)將3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品利用乙酸乙酯和/或乙酸丁酯溶解，加入柱層層析硅膠充分混合，旋蒸干燥后干法上柱；

(2)利用所述洗脫液對上柱后的硅膠柱進行梯度洗脫，分段收集所得洗脫級分并進行監測；

(3)將含有3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素的洗脫級分進行旋轉蒸發，得到3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素。

其中優選地，所述步驟(1)中：

所述3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品溶液與柱層層析硅膠以1:1-1:4的質量比混合。

并且，所述柱層層析硅膠的規格為粒徑100目-300目。

在上柱時，混有3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素的柱層層析硅膠與硅膠柱中預填充的柱層層析硅膠之間的質量比為1:5-1:10，然后以石油醚對裝填后的硅膠層析柱進行潤洗。

所述步驟(2)中：

所述梯度洗脫包括，先用低極性洗脫液洗脫以去除3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素粗品中的雜質，再用高極性洗脫液洗脫以得到3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素。

其中優選地，所述洗脫液為石油醚與乙酸乙酯并加入0.01％-0.1％(體積比)的二乙胺、三乙胺和N,N-二異丙基乙基胺中的一種或多種形成的混合液；

并且步驟(2)包括：在洗脫開始時采用其中乙酸乙酯與石油醚的體積比為1:1-1.5:1并加入0.01％-0.1％(體積比)的二乙胺、三乙胺和N,N-二異丙基乙基胺中的一種或多種的混合液作為低極性洗脫液，洗脫3-5個柱體積；然后使洗脫液中的乙酸乙酯與石油醚的體積比增大至2:1形成高極性洗脫液，洗脫4-6個柱體積。洗脫過程中，優選以高效液相色譜或薄層層析監測不同洗脫級份中的3-O-乙酰-4”-O-異戊酰泰樂菌素。

或者優選地，所述洗脫液為石油醚與乙酸丁酯并加入0.01％-0.1％(體積比)的二乙胺、三乙胺和N,N-二異丙基乙基胺中的一種或多種形成的混合液；