[發明專利]用于檢測釀膿鏈球菌的LAMP試劑盒及其專用引物

有效

• 申請號: 201510031436.1
• 申請日: 2015-01-22
• 公開（公告）號: CN104630354B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發明（設計）人: 袁靜;趙向娜;賀曉明;李環;黃思妺;劉威
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司11322
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及細菌的分子生物學，特別是涉及一種釀膿鏈球菌的LAMP試劑盒及其專用引物與其在檢測釀膿鏈球菌中的應用。

背景技術

釀膿鏈球菌臨床感染及治療現狀

釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)，即A群鏈球菌(Group A streptococcus，GAS，是根據抗原構造不同定義為A群)，β溶血(是指能夠完全使綿羊血細胞瓊脂溶血)，是人體的重要致病菌之一，可以引起很多種疾病，引起的感染性疾病主要有急性咽炎、急性扁桃體炎，也可致肺部感染、猩紅熱、皮膚軟組織感染，并可致全身性感染。釀膿鏈球菌也是引起變態反應性疾病風濕熱和急性腎小球腎炎的間接原因。近年來，A群鏈球菌常引起嚴重的感染，由侵襲性A群鏈球菌(invasive group A streptococcus infections)引發的疾病的發病率增長，使人們對該類細菌感染更加關注。

釀膿鏈球菌可侵襲任何年齡的人，但發病者多為兒童。正常人鼻咽部、皮膚可帶菌，并有由肛門、陰道帶菌引起暴發流行的報告。呼吸道與直接接觸均可傳播。亦有進食被污染食物引起咽峽炎暴發的報道。生活貧困、衛生條件差、居住擁擠、密切接觸等均有助于釀膿鏈球菌感染的發生。

目前，釀膿鏈球菌感染的治療藥物首選青霉素，但應考慮到可能有耐藥菌株，應加大劑量或改用它藥，如紅霉素、克林霉素、第一代、二代頭孢類抗生素等。最好參照當地藥敏結果選用。

檢測釀膿鏈球菌的方法主要是傳統的培養鑒定、血清學分析等，存在耗時和結果不易判定等缺點。因此，快速、準確檢測病原菌，予以規范合理的抗生素治療，是控制釀膿鏈球菌感染的有效措施。

LAMP技術介紹

環介導恒溫核酸擴增技術(1oop-mediated isothermal amplification，LAMP)是由Notomi(Notomi T，et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA.Nucleic Acids Res 2000；28(12):63.)發明的一種新型基因擴增技術。具體方法是針對靶基因(DNA或者cDNA)的6個區域，設計4-6種特異引物，利用鏈置換DNA聚合酶，在等溫條件下可以高效、快速、高特異地擴增靶序列，結果直接靠擴增副產物焦磷酸鎂的沉淀濁度進行判斷。LAMP技術具有快速高效、特異性強、靈敏度高、操作簡單、檢測直觀和設備要求低等特點。

自2000年發明以來，LAMP技術已被迅速用于病原微生物檢測、遺傳病診斷、食品安全等領域的分子生物學檢測領域。近年來，國外已將該技術廣泛應用于病原體檢測。Masaki Imai等人(Imai M，Ninomiya A，Minekawa H，et al.Rapid diagnosis of H5N1 avian influenza virus infection by newly developed influenza H5hemagglutinin gene-specific loop-mediated isothermal amplification method.J Virol Methods.2007；141(2):173-80.)利用LAMP建立了禽流感病毒的實驗室確診體系；Nobuyuki Hayashi等人(Hayashi N，Arai R，Tada S，Taguchi H，Ogawa Y.Detection and identification of Brettanomyces/Dekkera sp.yeasts with a loop-mediated isothermal amplification method.Food Microbiol.2007；24(7-8):778-85.)針對四種香酒酵母的ITS序列設計了LAMP特異性引物，建立了高效的LAMP檢測體系。LAMP還可以檢測其它與人類相關的病毒，如病毒性出血性敗血病(VHS)、巨細胞病毒(CMV)、埃博拉病毒(EBOV)、慢性伯基特淋巴瘤病毒(EBV)、虹彩病毒、人類瘡疹病毒8型、造血組織壞死病毒(工HHNV)、番茄斑萎病毒、番茄黃化曲葉病毒等。目前，國內外均未見有用于檢測釀膿鏈球菌的LAMP試劑盒及其專用引物。

發明內容

本發明提供了用于對釀膿鏈球菌進行LAMP檢測的引物，以實現釀膿鏈球菌的批量檢測，提高檢測的特異性和靈敏度。