[發明專利]一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201510029499.3
• 申請日: 2015-01-21
• 公開（公告）號: CN104630318B
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 張學武;何勝潔
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;A61K38/01;A23L33/18;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取3～20g金錢龜肉糜和超純水混合后攪拌，配制成濃度為10～50％(w/v)的混合溶液，加入胰蛋白酶進行酶解，水解過程中使用0.05～0.2mol/L的NaOH或HCl來調節反應體系的pH值，控制pH值在pH±0.05之間，酶解完畢后滅酶，冷至室溫，將酶解液離心，取上清液；所述胰蛋白酶水解條件是：pH＝7～9，酶解溫度30～60℃，酶解時間4～15h，酶與底物濃度比為0.1％～0.5％(w/w)

(2)取步驟(1)得到的酶解液，依次用截留分子量分別為10KD、5KD以及3KD的超濾膜過濾，從而獲得分子量大小范圍為0-3KD、3-5KD和大于10KD的金錢龜多肽的酶解液；

(3)取步驟(2)得到的0-3K的酶解液進行葡聚糖凝膠Sephadex G-15柱層析，水洗脫，按照出峰的時間順序，分別收集得到4個多肽組份分別命名為E1、E2、E3和E4，即金錢龜抗腫瘤多肽；所述金錢龜抗腫瘤多肽組份中E1和E2經MALDI-TOF-TOF質譜分析鑒定得到其中三條肽序列為PGVKGPR、SSPGPPVH和KLGPKGPR。

2.根據權利要求1所述的一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述滅酶為在80～100℃水中滅酶10～20min。

3.根據權利要求1所述的一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述離心為在6000～10000r/min下離心30～60min。

4.根據權利要求1所述的一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法，其特征在于步驟(2)所述的超濾在CO₂的壓力為0.1～0.25Mpa的室溫下用超濾杯結合超濾膜超濾。

5.根據權利要求1所述的一種金錢龜抗腫瘤多肽的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的葡聚糖凝膠Sephadex G-15分離純化，具體條件為：柱體積為100～200mL，上樣量為1～4mL，上樣濃度為20～150mg/mL，流動相為水，流速為0.3mL/min，每4min收集一管，總共收集110管，檢測波長為218nm。