[發(fā)明專利]一種固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1聯(lián)合應(yīng)用對大豆毛油進(jìn)行脫膠的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510028129.8
• 申請日: 2015-01-21
• 公開（公告）號: CN104593145A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于殿宇;江連洲;解桂東;王立琦;劉飛;杜華楠;許多現(xiàn);李俊
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C11B3/00
• 分類號: C11B3/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯(lián)合應(yīng)用對大豆毛油進(jìn)行脫膠的方法。

背景技術(shù)

植物油精煉一般包括脫膠、中和、脫色和脫臭等工序。兩個主要的工藝可分為化學(xué)精煉和物理精煉。脫膠是毛油精煉的第一工序,?用于從毛油除去磷脂和粘液物質(zhì)。酶法有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),?如專一的反應(yīng),?反應(yīng)條件溫和,?和較少的環(huán)境污染,?使其在具有更高的附加值或獨(dú)特的營養(yǎng)和功能性方面的新產(chǎn)品開發(fā)方面更具有競爭力。與傳統(tǒng)的水化脫膠工藝相比,?酶法脫膠減少大量的酸和堿的使用,?減少精煉過程中產(chǎn)生的廢水,?提高產(chǎn)品質(zhì)量和降低操作成本。

傳統(tǒng)的酶法脫膠是水解磷脂的脂肪酸鏈而生成溶血性磷脂，可以通過水化的方法除去。因此，磷脂酶脫膠是油脂脫膠的一種新方法，同傳統(tǒng)的脫膠方法相比，酶法脫膠可大大節(jié)約化學(xué)物質(zhì)的消耗量，幾乎不產(chǎn)生廢水，在環(huán)保、經(jīng)濟(jì)、質(zhì)量等方面具有潛在的優(yōu)勢。磷脂酶A₁適用于磷脂乳化液的改性和植物油的脫膠,?磷脂酶A₁特定水解磷脂生成Sn-1溶血磷脂。而磷脂酶C卻能特異性水解磷酸基與甘油基之間的磷氧鍵，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成為食用油的一部分。因此，采用磷脂酶C和磷脂酶A₁脫膠，不僅能實(shí)現(xiàn)物理精煉，還可提高脫膠油的得率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明根據(jù)PLC、PLA₁的各自特點(diǎn)，開發(fā)出磷脂酶C-磷脂酶A₁雙酶脫膠技術(shù)，利用磷脂酶C脫膠提高油脂得率這一特點(diǎn)，先采用少量PLC進(jìn)行常規(guī)酶法脫膠操作，而后利用磷脂酶A₁脫膠徹底速度快的特點(diǎn)，加入適量PLA₁實(shí)施脫膠操作，考察PLC和PLA₁的加入時間，加入量之比以及之間的關(guān)系。為PLC和PLA₁在毛油脫膠中的應(yīng)用提供了條件。用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁來進(jìn)行脫膠的方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：一、磷脂酶C和磷脂酶A₁的固定化；二、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯(lián)合脫膠；三、磷含量測定；四、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁重復(fù)利用次數(shù)的研究。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式一：一種固定化磷脂酶A₁和固定化磷脂酶C聯(lián)合應(yīng)用對大豆毛油進(jìn)行脫膠的方法，其特征在于用固定化磷脂酶A₁和固定化磷脂酶C大豆毛油脫膠的方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：一、磷脂酶A₁和磷脂酶C的固定化：首先稱取一定量的海藻酸鈉于40℃水浴保溫溶解，同時稱取一定量的殼聚糖于5%的醋酸溶液中，40℃水浴保溫溶解；再向溶解的殼聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl₂溶液，混勻，稱取一定量的磷脂酶A₁，加入到10?mL海藻酸鈉溶液中，攪拌均勻，靜置一段時間，用滅菌后的注射器吸取混合液，以約5滴/s的速度注入殼聚糖醋酸溶液、CaCl₂混合溶液中，以180?r/min轉(zhuǎn)速攪拌，將其置于4℃環(huán)境固定化10?h，以同樣的方法對磷脂酶C進(jìn)行固定；二、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯(lián)合脫膠：取水化大豆毛油300?g，預(yù)熱至75℃，加入45%檸檬酸0.?6?mL混合攪拌維持30?min；冷卻至溫度為30~40℃左右，加入4mol/L?NaOH溶液和一定量的蒸餾水混合均勻，固定化磷脂酶C在固定化酶添加量0.14g/kg，初始PH值為7.0，反應(yīng)溫度為50℃，攪拌速度為250r/min，反應(yīng)時間為1.5h。然后加入磷脂酶A₁在固定化酶添加量0.12g/kg，初始PH值為6.0，反應(yīng)溫度為50℃，攪拌速度為250r/min，反應(yīng)時間為1.0h。在此最佳條件下測得脫膠油中的磷含量為4.3mg/kg，DAG增加率為1.3%，節(jié)省時間約兩小時同時確定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁連續(xù)用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結(jié)果酶活力仍保持在80％左右。

具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟二中固定化酶脫膠條件進(jìn)行進(jìn)一步確定，結(jié)果為磷脂酶A₁反應(yīng)后的反應(yīng)體系的起始pH值為?6.5～8.0，反應(yīng)時間0.5~2.5h，反應(yīng)溫度為30～80℃，固定化酶添加量0.08~0.16g/kg，用優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行固定化磷脂酶A₁對大豆毛油脫膠，在最優(yōu)條件下測的磷含量為4.3mg/kg，同時確定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁連續(xù)用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結(jié)果酶活力仍保持在80％左右，將固定化酶脫膠后的油脂得率與常規(guī)酶法脫膠或者是兩種酶單獨(dú)脫膠后油脂得率進(jìn)行比較，得到固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯(lián)合應(yīng)用對大豆毛油脫膠后的油脂得率增長1.3倍。