[發明專利]一種固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1聯合應用對大豆毛油進行脫膠的方法

在審

• 申請號: 201510028129.8
• 申請日: 2015-01-21
• 公開（公告）號: CN104593145A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 于殿宇;江連洲;解桂東;王立琦;劉飛;杜華楠;許多現;李俊
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C11B3/00
• 分類號: C11B3/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯合應用對大豆毛油進行脫膠的方法，其特征在于用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁大豆毛油脫膠的方法通過以下步驟實現：一、磷脂酶C和磷脂酶A₁的固定化：首先稱取一定量的海藻酸鈉于40℃水浴保溫溶解，同時稱取一定量的殼聚糖于5%的醋酸溶液中，40?℃水浴保溫溶解；再向溶解的殼聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl₂溶液，混勻，稱取一定量的磷脂酶A₁，加入到10?mL海藻酸鈉溶液中，攪拌均勻，靜置一段時間，用滅菌后的注射器吸取混合液，以約5滴/s的速度注入殼聚糖醋酸溶液、CaCl₂混合溶液中，以180?r/min轉速攪拌，將其置于4℃環境固定化10?h，以同樣的方法對磷脂酶C進行固定；二、固定化酶脫膠：取水化大豆毛油300?g，預熱至75℃，加入45%檸檬酸0.?6?mL混合攪拌維持30?min；冷卻至溫度為30~40℃左右，加入4?mol/L?NaOH溶液和一定量的蒸餾水混合均勻，固定化磷脂酶C在固定化酶添加量0.14?g/kg，初始PH值為7.0，反應溫度為50?℃，攪拌速度為250?r/min，反應時間為1.5?h，然后加入磷脂酶A₁在固定化酶添加量0.12?g/kg，初始PH值為6.0，反應溫度為50℃，攪拌速度為250?r/min，反應時間為1.0?h，在此最佳條件下測得脫膠油中的磷含量為4.3?mg/kg，DAG增加率為1.3%，節省時間約兩小時，同時確定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80％左右。

2.根據權利要求1所述的用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯合應用對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中固定化酶脫膠條件進行進一步確定，結果為磷脂酶A₁反應后的反應體系的起始pH值為?6.5～8.0，反應時間0.5~2.5?h，反應溫度為30～80?℃，固定化酶添加量0.08~0.16?g/kg，用優化結果進行固定化磷脂酶A₁對大豆毛油脫膠，在最優條件下測的磷含量為4.3?mg/kg，同時確定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁連續用于對大豆毛油的脫膠，使用6個批次后，測定固定化酶相對活力，結果酶活力仍保持在80％左右，將固定化酶脫膠后的油脂得率與常規酶法脫膠或者是兩種酶單獨脫膠后油脂得率進行比較，得到固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A₁聯合應用對大豆毛油脫膠后的油脂得率增長1.3倍。