[發明專利]一種法氏囊病毒效價的測定方法

在審

• 申請號: 201510027662.2
• 申請日: 2015-01-20
• 公開（公告）號: CN104630385A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 江興華
• 申請（專利權）人: 福州大北農生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種法氏囊病毒效價的測定方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1)?細胞傳代：將培養48小時的用于鋪板的細胞倒去培養液，用磷酸鹽緩沖液將細胞洗兩遍后，加入胰酶消化液進行消化，然后加入與倒去的培養液等體積的營養液，混合均勻，得到細胞原液；

2)?消化后細胞原液細胞計數及細胞原液的最終稀釋：將步聚1）的細胞原液取出一部分，稀釋后，加入細胞計數板中進行計數，并換算出細胞原液的密度；

再根據細胞原液的密度，將細胞原液稀釋至細胞密度為2-3×10⁵個細胞/ml的細胞稀釋液，待用；

3)?鋪細胞板并培養：將上述細胞稀釋液加入96孔細胞培養板中，每孔加細胞稀釋液100ul，然后將細胞培養板置于37℃二氧化碳培養箱中培養24h，待用；

4)?病毒的稀釋：取法氏囊病毒液，用不含血清的營養液逐步稀釋，得到10^-6，10^-7，10^-8的法氏囊病毒稀釋液；

5）細胞板換液并加病毒液培養觀察：將步驟3）中培養24h的96孔細胞培養板倒去廢液，然后將10^-6，10^-7，10^-8的法氏囊病毒稀釋液加入96孔細胞培養板中，每個稀釋度加6孔，每孔100ul，然后將細胞培養板置于37℃二氧化碳培養箱中培養96?h；

6）細胞病變觀察及結果判定：上述細胞培養板培養96h后，觀察細胞病變，以100%的細胞病變作為判定標準，計算病毒效價TCID₅₀/0.1mL。

2.根據權利要求1所述的一種法氏囊病毒效價的測定方法，其特征在于：所述的步驟1）中胰酶消化液的質量濃度為0.25-0.3%。

3.根據權利要求1所述的一種法氏囊病毒效價的測定方法，其特征在于：所述的步驟1）加入的胰酶消化液完全浸沒細胞。

4.根據權利要求1所述的一種法氏囊病毒效價的測定方法，其特征在于：所述的步驟2）具體操作為：取步聚1）的細胞原液1-1.5ml，稀釋3-5倍，然后取30-35ul稀釋后的細胞原液，加入細胞計數板中進行計數，并換算出細胞原液的密度。