[發(fā)明專利]檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510022203.5
• 申請(qǐng)日: 2015-01-16
• 公開（公告）號(hào): CN104678105A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范鈺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

1.檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是，包括試劑盒盒體，所述盒內(nèi)放置包被反應(yīng)板以及分別包裝好的試劑，所述試劑包括標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、酶標(biāo)抗體、濃縮清洗液、顯色劑A、顯色劑B、終止液，所述酶標(biāo)抗體為用辣根過氧化物酶交聯(lián)的鼠抗Cripto-1的單克隆抗體，所述包被反應(yīng)板用于包被的抗體為兔抗Cripto-1的多克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是，所述顯色劑A為1%四甲基聯(lián)苯胺,所述顯色劑B為過氧化氫。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是，所述標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品分別為Cripto-1的凍干粉，純度為≥95%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是，所述終止液為硫酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是，所述濃縮清洗液為磷酸鹽緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）包被反應(yīng)板的制備：

將20-30ug/ml濃度梯度的兔抗Cripto-1的多克隆抗體加入酶標(biāo)板中，每孔50μl，25°C?2小時(shí)后再置4°C過夜,?之后凍干機(jī)凍干保持反應(yīng)板孔中干燥制成包被反應(yīng)板，4?℃?存放備用；

（2）酶標(biāo)抗體的制備：

取60ul溶于二甲基甲酞氨的長(zhǎng)臂生物素,?加人lml單抗Cripto-1,?25°C反應(yīng)2小時(shí),?經(jīng)透析后-20°C凍存；

（3）濃縮清洗液的制備：配制0.1M的磷酸鹽緩沖液；

（4）顯色劑的配制；

（5）終止液的配制：配制2M的H₂SO₄。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備方法，其特征是，上述步驟（2）中，所述長(zhǎng)臂生物素的濃度為0.01?mol/l，所述單抗Cripto-1的濃度為1mg/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備方法，其特征是，上述步驟（3）中，所述磷酸鹽緩沖液包括Na₂HPO₄·12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備方法，其特征是，上述步驟（4）中，顯色劑A的配制方法為：將檸檬酸溶解在499ml的超純水中，加入TMB，充分溶解后，用稀HCl調(diào)pH至2.6，加入超純水，定容到所需體積；顯色劑B的配制方法為：將檸檬酸、十二水合碳酸氫鈉溶解在499ml的超純水中，充分溶解后，用稀HCl調(diào)pH至5.2，加入超純水，定容到所需體積。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)Cripto-1的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備方法，其特征是，使用前將顯色劑A?液與顯色劑B?液以1∶1體積比混合。