[發明專利]一種用于魚腥草分子鑒定的DNA條形碼，引物、試劑盒和鑒定方法

有效

• 申請號: 201510020393.7
• 申請日: 2015-01-15
• 公開（公告）號: CN104593365B
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 鐘軍;熊興耀
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所43114
• 代理人: 袁靖

技術領域

本發明屬于植物分子生物學領域，特別涉及一種用于魚腥草分子鑒定的DNA條形碼，引物、試劑盒和鑒定方法。

背景技術

魚腥草(Houttuynia cordata Thunb)屬三白草科蕺菜屬，是宿根性多年生草本植物。俗稱有側耳根、豬鼻孔、臭草、芩草等，因其莖葉搓碎后有魚腥味，故名魚腥草。魚腥草不僅可以嫩莖葉和地下莖作蔬菜食用，而且全株又可鮮用或曬干入藥，它已經被國家衛生部正式確定為“既是藥品，又是食品”的極具開發潛力的資源之一，日益受到人們的關注。

因國內外對魚腥草的需求急劇增加，使其貨源供應不足，各地曾一度出現混淆品，少數不法分子摻偽作假、以偽亂真，兜售假藥以牟取暴利，加之有些參與藥材流通的人員缺乏必要的鑒別知識或經驗不足，使魚腥草混偽品進入商品流通渠道，嚴重影響了藥材質量和臨床療效。由于白苞裸蒴的外形與魚腥草很相似(圖1)，因此是目前市場上常見的魚腥草混偽品。

以往大都以地上莖、地下莖和葉片等形態差異和解剖學特征，有時結合理化分析來鑒別魚腥草及其混偽品，但以上鑒定方法一是非長期從事該工作的人員不能勝任原植物和藥品的鑒定工作；二是費時費力，且準確鑒定存在一定難度。近年來，隨著分子生物學技術的發展，體現物種遺傳本質的DNA分子已成為物種鑒定的有效分析手段。目前通過DNA分子特征對魚腥草植物進行分類學鑒定的研究報道缺少真偽品的核苷酸差異比較信息，不能提供可靠的分子鑒別數據。DNA條形碼是利用基因組中一段公認標準的DNA片段來對物種進行準確鑒定的新技術，它具有操作簡便、準確、快速的優勢，不受樣品發育階段(葉片、種子、花等)、藥材形態(原藥材或粉末)以及研究者專業水平的限制，具有較強的通用性。

發明內容

本發明的目的是克服現有檢測技術中存在的缺陷，從分子水平提供一種用于魚腥草分子鑒定的DNA條形碼，引物、試劑盒和鑒定方法。本發明將加速分子標記輔助選擇在魚腥草及其混偽品鑒定方法的應用。

一種用于魚腥草分子鑒定的DNA條形碼，序列如SEQ NO:1。

一種用于魚腥草分子鑒定的引物，序列如下：

正向序列F：GGAAGTAAAAGTAACAAGG，

反向序列R：TCCTTCCGCTTATTGATATGC。

一種用于魚腥草分子鑒定的試劑盒，包括上所述的引物，以及進行PCR反應所需的各種試劑。

PCR反應所需的各種試劑包括：10×Buffer、dNTP、MgCl₂、TaqDNA聚合酶。

所述的用于魚腥草分子鑒定的試劑盒還包括測序試劑。

一種用于魚腥草分子鑒定的方法：該方法用于區分魚腥草與白苞裸蒴，以上述的核酸分子為引物，以待檢測樣品的基因組DNA為模板，進行PCR擴增，分別擴增出642bp和626bp大小的DNA片段，序列如SEQ NO:1和NO:2；將擴增出來的片段進行測序：