[發明專利]雜交瘤細胞DBP-4E10及其產生的鄰苯二甲酸二丁酯單克隆抗體

有效

• 申請號: 201510020296.8
• 申請日: 2015-01-15
• 公開（公告）號: CN104711230B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 時國慶;孫清;鄧乾民;栗時鋒;高永杰;曹雨
• 申請（專利權）人: 江蘇衡譜分析檢測技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 皋吉甫

本發明提供了雜交瘤細胞株4E10、其分泌產生的抗鄰苯二甲酸二丁酯DBP單克隆抗體及其應用。該雜交瘤細胞株4E10可以用于制備高效價鄰苯二甲酸二丁酯DBP抗體，鼠腹水抗體酶聯免疫吸附分析(ELISA)法測得的效價可達3.12×10⁶；該抗鄰苯二甲酸二丁酯DBP單克隆抗體靈敏度高，對鄰苯二甲酸二丁酯DBP的50％抑制濃度即IC50為0.22 mg/mL，其用于測定鄰苯二甲酸二丁酯DBP含量，實際應用價值大。

技術領域

本發明涉及雜交瘤細胞株DBP‐4E10及其產生的鄰苯二甲酸二丁酯單克隆抗體。

背景技術

鄰苯二甲酸酯類化合物(PAEs)是一類環境激素類物質，具有雌激素活性，干擾生物體內分泌系統正常功能、導致突變、畸變和癌細胞增殖。2005年，歐盟將鄰苯二甲酸二辛酯(DEHP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)及鄰苯二甲酸丁芐酯(BBP)評定為“第二類生殖毒性”。其中，DBP被認為是毒性最高的酞酸酯類化合物。

PAEs化合物是塑料工業的主要增塑劑和軟化劑，廣泛應用于食品包裝材料、容器、醫療用品及塑料等的制造。由于其廣泛應用以及從各種制品中的釋放，酞酸酯類化合物已經幾乎滲透到我們生活的每一個角落。研究表明，我國居民DBP每日攝入量為12.2mg/kg，超過世界衛生組織建議的10mg/kg.d的每日最大容許攝入量標準。食品被認為是人類暴露于酞酸酯類化合物的主要途徑。食品中酞酸酯類化合物的污染主要來自于食品的塑料包裝以及生產過程。這是因為酞酸酯是一種脂溶性化合物，它很容易進入食品的脂肪、油脂中，并在其中富集。

DBP現有的檢測方法GC、MS、HPLC測定DBP靈敏度高、精確度好，而且能分別測定結構相似的多種化合物及其異構體，是目前最理想的檢測方法。但是這類分析方法體系將待測污染物從樣品中分離提取并去除雜質干擾的前處理過程十分復雜，操作費時，分析成本昂貴。所以開發操作簡單、快速、經濟且靈敏度高的檢測方法具有重要的實際意義。

免疫分析方法將免疫反應的高特異性和現代測試手段高靈敏性相結合，具有快速、經濟、樣品所需量少、前處理簡單等優點，成為現代生物化學、醫學、化學分析和環境監測等領域的研究熱點。免疫分析是利用抗原抗體的特異性的結合反應和抗原、抗體上的標記物的放大作用來對超微量待測物進行定性、定量檢測，所以要研究建立針對鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)的任何一種免疫學檢測技術，都必須先獲得抗鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)的抗體。

發明內容

本發明所要解決的問題是提供雜交瘤細胞株DBP‐4E10及其產生的鄰苯二甲酸二丁酯DBP的單克隆抗體

本發明提供了雜交瘤細株DBP‐4E10，該細胞株已于2014年12月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是，中國，北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC NO.10202。分類命名為S/P20雜交瘤細胞。

抗鄰苯二甲酸二丁酯單克隆抗體由保藏編號為CGMCC NO.10202的雜交瘤細胞株DBP‐4E10分泌產生。該DBP單克隆抗體可以識別鄰苯二甲酸二丁酯，對鄰苯二甲酸二丁酯的50％抑制濃度IC50為0.22mg/L。

抗鄰苯二甲酸二丁酯單克隆抗體在鄰苯二甲酸二丁酯測定中的應用。