[發明專利]雜交瘤細胞DBP-4E10及其產生的鄰苯二甲酸二丁酯單克隆抗體

有效

• 申請號: 201510020296.8
• 申請日: 2015-01-15
• 公開（公告）號: CN104711230B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 時國慶;孫清;鄧乾民;栗時鋒;高永杰;曹雨
• 申請（專利權）人: 江蘇衡譜分析檢測技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 皋吉甫

1.雜交瘤細胞株DBP‐4E10，其特征在于：已保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC NO.10202，其中所述的雜交瘤細胞是使用DBP‐BSA抗原免疫小鼠后將產生抗體的淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合篩選獲得，其中所述的DBP‐BSA抗原的制備方法如下：

1)4‐硝基鄰苯二甲酸二丁酯的合成

將2.5克4‐硝基鄰苯二甲酸溶于50mL正丁醇中，向其中緩慢滴入1mL濃H₂SO₄作催化劑，在120℃下反應并不斷攪拌；反應結束后，用10％Na₂ CO₃洗滌三次，每次10mL；80℃旋轉蒸發除去正丁醇和水；得油狀物質4‐硝基鄰苯二甲酸二丁酯，稱重；

2)4‐氨基鄰苯二甲酸二丁酯的合成

稱取0.1523克4‐硝基鄰苯二甲酸二丁酯；加入28mL苯和0.28g鋅粉，然后分三次加入8.2mL濃HCl，攪拌反應18min后再加入0.28克鋅粉，室溫攪拌反應12h；反應結束后，分液；然后用34mLH₂O清洗苯層，分別用5g無水Na₂SO₄干燥苯層三次，50℃旋轉蒸發除去苯；得黃色4‐氨基鄰苯二甲酸二丁酯固體，稱重；

3)人工抗原的合成

配置A液：稱取0.0466克4‐氨基鄰苯二甲酸二丁酯于50mL三角瓶中，依次加入0.1mL濃HCl、3mLH₂O和2mL二甲基甲酰胺；置冰浴5度下，攪拌；逐滴加入0.2mol/L亞硝酸鈉，至淀粉KI試紙變藍，反應30分鐘；

配置B液：4mg/mL BSA的硼酸鈉緩沖溶液40mL，pH9.0；

將B液逐滴加入A液中，逐漸有橙紅色溶液出現，繼續反應2h，得粗產品；反應液裝入透析袋中，使用pH7.4，0.01M的磷酸鹽緩沖液透析3天，每天換兩次透析液；收集透析袋內的液體，即為制得的DBP‐BSA人工抗原；

4)人工抗原的鑒定

通過紫外光譜掃描法鑒定表明制備得到了鄰苯二甲酸二丁酯的完全抗原DBP‐BSA。

2.權利要求1所述的雜交瘤細胞株DBP‐4E10分泌的抗鄰苯二甲酸二丁酯DBP單克隆抗體，其特征在于：它由所述的雜交瘤細胞株DBP‐4E10所分泌產生。

3.權利要求2所述的抗鄰苯二甲酸二丁酯DBP單克隆抗體的應用，其特征在于在鄰苯二甲酸二丁酯DBP分析檢測中的應用，對鄰苯二甲酸二丁酯DBP具有較好的親和力和檢測靈敏度，用于食品安全中鄰苯二甲酸二丁酯DBP免疫檢測。