[發明專利]小麥黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)的實時熒光定量鑒定方法及試劑盒在審
| 申請號： | 201510017724.1 | 申請日： | 2015-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN104774919A | 公開（公告）日： | 2015-07-15 |
| 發明（設計）人： | 高利;陳萬權;蔚慧欣;劉太國;劉博 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院植物保護研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 吳泳歷 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 小麥 黑穗菌 tilletia controversa hn 實時 熒光 定量 鑒定 方法 試劑盒 | ||
1.小麥黑穗菌(Tilletia?controversa?Kühn)的實時熒光定量鑒定方法，包括如下步驟：
(1)獲得TCK陽性質粒標準品的實時定量標準曲線，其中Ct值為縱坐標，起始模板拷貝數為橫坐標；
(2)提取待測樣品的DNA；
(3)以所述待測樣品的DNA為模板進行實時熒光定量PCR反應，
(4)根據所述實時熒光定量PCR反應獲得的Ct值以及所述實時定量標準曲線得到所述待測樣品中TCK的拷貝數；
其特征在于：所述實時熒光定量PCR反應采用的引物如下：
上游引物??ACGACCGACTTTCCGAGAGC，
下游引物??GTGTGGGACGAAGGCATCAA。
2.根據權利要求1所述的鑒定方法，所述實時熒光定量PCR反應的體系如下：
3.根據權利要求1所述的鑒定方法，所述實時熒光定量PCR反應的體系程序如下：95℃10分鐘，95℃15秒，60℃60秒，40個循環。
4.用于鑒定小麥黑穗菌(Tilletia?controversa?Kühn)的實時熒光定量試劑盒，其特征在于：包括除DNA模板之外的用于實時熒光定量PCR反應的試劑和標準曲線方程說明書；
所述試劑中的引物如下：
上游引物??ACGACCGACTTTCCGAGAGC，
下游引物??GTGTGGGACGAAGGCATCAA；
所述標準曲線方程為TCK陽性質粒標準品的實時定量標準曲線的方程，所述標準曲線的縱坐標為Ct值，橫坐標為所述TCK陽性質粒標準品的起始模板拷貝數。
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