[發明專利]一種異源交聯物及其在風疹病毒檢測中的應用

有效

• 申請號: 201510015885.7
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104650236B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 潘劍用;周海濤;閔丹
• 申請（專利權）人: 英科隆生物技術（杭州）有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;G01N33/569
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司33100
• 代理人: 徐關壽

1.一種由兩種異源的抗體通過交聯反應而獲得的異源交聯物，其特征在于，所述的異源交聯物包括由小鼠anti-RV McAb和健康的未感染RV的人IgG所形成的四聚體形式的異源交聯抗體，所述的異源交聯物是由以下方法制備得到：

(1)將5mg小鼠anti-RV McAb溶解于交聯緩沖液中，攪拌加入50μl SPDP交聯劑，室溫下反應2個小時后，裝入透析袋，用還原緩沖液透析，換液四次；其中所述的交聯緩沖液包括0.1M磷酸鉀,0.1M NaCl,pH7.5；所述交聯劑濃度為3.2mg/ml，交聯劑溶解于無水乙醇中；所述的還原緩沖液包括0.1M乙酸鈉,0.1M NaCl,pH4.5；

(2)將5mg健康的未感染RV的人IgG溶解于交聯緩沖液中，攪拌加入50μl SPDP交聯劑，室溫下反應2個小時后，裝入透析袋，用交聯緩沖液透析，換液四次；

(3)在(1)中加入30μl DTT，室溫反應30分鐘后，裝入透析袋，用交聯緩沖液透析，換液四次；所述的DTT濃度為1M，是將DTT溶解于0.01M乙酸鈉溶液至終濃度為1M，pH5.2；

(4)將(2)、(3)中的處理物混合，在4℃下反應15個小時；

(5)往(4)中加入0.4mg碘乙酰胺封閉劑，反應30分鐘以封閉未反應的活性基團，然后裝入透析袋，用交聯緩沖液透析，換液四次；

(6)將(5)中的產物裝載到HiLoad 16/60Superdex 200PG凝膠過濾柱中，以交聯緩沖液進行洗脫，并利用HD-3紫光分析儀實時檢測洗脫產物在280nm波長時的吸光值，同時用XWT-S小型記錄儀繪制層析圖譜，按峰收集洗脫產物；

(7)獲得含有四聚體形式的異源交聯抗體的異源交聯物。

2.如權利要求1所述的異源交聯物，其特征在于，所述異源交聯物保存在一種凍存液中，并在-20℃下保存，所述凍存液包括穩定劑，甘油和防腐劑。

3.如權利要求2所述的異源交聯物，其特征在于，所述穩定劑選自BSA或明膠，所述防腐劑選自疊氮鈉或硫柳汞。

4.如權利要求1至3之一所述的異源交聯物在制備免疫檢測試劑盒中的應用。