[發明專利]一種樹突狀細胞的制備方法、所得樹突狀細胞在審
| 申請號： | 201510015556.2 | 申請日： | 2015-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN104531617A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 史軍;呂垚 | 申請（專利權）人： | 北京益諾勤生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0784 | 分類號： | C12N5/0784 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 100170 北京市石景山區八*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 樹突 細胞 制備 方法 所得 | ||
1.一種樹突狀細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：獲得間充質干細胞；
步驟2：取所述間充質干細胞，貼壁培養后，得貼壁細胞；
步驟3：培養、誘導所述貼壁細胞，收集樹突狀細胞。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中的所述誘導所用誘導試劑包括第一誘導試劑和第二誘導試劑；
所述第一誘導試劑包括GM-CSF、IL-4、胎牛血清和谷氨酰胺；
所述第二誘導試劑包括TNF-α。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導試劑中，所述GM-CSF的濃度為100ng/mL～200ng/mL。
4.根據權利要求2或3所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導試劑中，所述IL-4的濃度為30ng/mL～50ng/mL。
5.根據權利要求2至4中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導試劑中，所述胎牛血清的濃度為10％。
6.根據權利要求2至5中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導試劑中，所述谷氨酰胺的濃度為2mmol/L～4mmol/L。
7.根據權利要求2至6中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述第二誘導試劑中，所述TNF-α的濃度為500UI/mL～1500UI/mL。
8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟3中所述培養、誘導包括：
向所述貼壁細胞中加入含所述第一誘導試劑的培養液，培養；補加所述培養液，再加入含所述第二誘導試劑的培養液；收集樹突狀細胞。
9.根據權利要求1至8任一項所述的制備方法，其特征在于，所述收集樹突狀細胞為：
將誘導并促熟后的樹突狀細胞離心清洗后吸去上清，加入1mL細胞凍存液，混勻后凍存于2mL的凍存管中，置于凍存盒中，放入-80℃冰箱，次日轉入液氮保存；所述細胞凍存液包括20％人血白蛋白、無血清培養基和DMSO，所述20％人血白蛋白、無血清培養基和DMSO的體積比為5:4:1。
10.如權利要求1至9中任意一項所述的制備方法制備獲得的樹突狀細胞。
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