[發明專利]一種基于SSR標記的京紅4號蘿卜雜交種純度鑒定的方法

在審

• 申請號: 201510012415.5
• 申請日: 2015-01-04
• 公開（公告）號: CN104561319A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 張麗;王慶彪
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于京紅4號蘿卜雜交種純度鑒定的引物序列，其特征在于，所述引物核苷酸序列如序列表SEQ?ID?No.1～2所示引物。

2.利用權利要求1中所述引物，檢測京紅4號蘿卜雜交種純度的方法，其特征包括以下步驟：

(1)快速提取京紅4號蘿卜雜交種基因組DNA：取種子下胚軸(種子發芽72小時)置于2.0mL離心管中；加入0.4mol?L^-1NaOH溶液100μl，鋼珠2個；在48孔研磨器上研磨1min；輕甩離心后，放于沸水中溫浴1min；10000rmp離心1min；取上清液10μl放入96孔PCR板中，加200μl?Tris緩沖液(PH＝8.0)，混勻備用。

(2)采用如序列表SEQ?ID?No.1～2所示引物進行PCR擴增：反應體系為：1μl?10×Buffer(含Mg²⁺)，0.8μl?2.5mM?dNTP，1U?Taq?DNA聚合酶，10μM?SSR上下游引物各加0.5μl，模板DNA?2μl，ddH₂O補足至10μl；PCR反應程序為94℃預變性5min；35個擴增循環，94℃30sec，60℃30sec，72℃1min；72℃延伸7min，4℃保存；

(3)將步驟(2)的擴增產物經10％聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染法染色，照相并統計結果，比較京紅4號雜交種及其雙親的特征譜帶，表現共顯性互補帶型的為京紅4號雜交種，只有親本之一帶型的為非雜交種，出現其他第三種帶型的為外來雜種；

(4)利用步驟(3)的統計結果計算供試京紅4號蘿卜雜交種純度：送檢測京紅4號雜交種純度(％)＝(總檢測種子粒數-非雜交種數-外來雜種數)/總檢測種子粒數×100％。