[發明專利]一種副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法

有效

• 申請號: 201510011558.4
• 申請日: 2015-08-04
• 公開（公告）號: CN104488823A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 陳洪波;程蕾;趙書紅;張晶;向敏;侯永清;高其雙;郭玲;邱銀生;黎旺明
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K35/74
• 代理公司: 武漢智權專利代理事務所(特殊普通合伙) 42225
• 代理人: 彭程程;沈林華

技術領域

本發明涉及動物模型構建領域，具體涉及一種副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法。

背景技術

HPS(Haemophilus?parasuis，副豬嗜血桿菌)是一種定居在豬上呼吸道部位的革蘭氏陰性短小桿菌，HPS的毒力菌株侵入豬體后會使豬產生嚴重的系統性炎癥疾病，臨床表現以格拉澤氏病(Disease)，即血纖維蛋白性心包炎、多發性關節炎和腦膜炎；有些感染豬只還表現出急性肺炎和急性敗血癥。

從上個世紀末至今，HPS感染給世界各國的養豬業造成了嚴重的損失，HPS已成為豬場最主要的細菌性病原體之一，在我國呈全國性病發趨勢。

現階段沒有預防HPS感染的有效措施。通常，在豬感染HPS后大量使用抗生素進行治療，但一方面抗生素使用會造成養殖成本上升；另一方面大量抗生素的使用會導致排泄物和肉制品中存有抗生素殘留，排泄物排入環境中容易造成環境污染，人體攝入含有抗生素的肉制品后，抗生素會在人體內聚集，導致人體抵抗力降低。因此，需要降低豬感染HPS后抗生素的使用量。

目前降低抗生素使用量的途徑包括使用疫苗和培育抗病豬種，由于抗病育種可以從根本上解決病原體感染，因此，抗病育種成為未來豬育種產業發展的新方向。研究顯示：常規的豬群中，不同的豬個體感染HPS后的表現存在差異，該差異與豬個體的遺傳基因有關，該現象為通過遺傳改良培育出抗性品系和/或抗性品種提供了充分的依據。

目前，本領域技術人員通過建立感染模型來篩選相關抗病基因，建立可靠的活體感染模型是培育出抗性品系和/或抗性品種的關鍵。建立感染模型(以下簡稱建模)具體是指：通過實施攻毒試驗，收集攻毒后(含對照)的豬只在臨床病征、生長發育、體溫變化、血液參數和免疫指標表型數據用以評判建模效果，最終在實驗室(或實驗動物中心等實驗性場地)復制出病原體感染豬只的相關生物學現象。

根據實驗豬只的區別，可以將現有的感染模型分為普通級、CD級(Colostrum-Deprived，禁食母豬初乳)、CDCD級(Caesarean-Derived?and?Colostrum-Deprived，剖腹產、禁食母豬初乳)和SPF級(Specific?pathogen?free，無特定病原體)。

普通級感染模型建立時，直接通過母體初乳對仔豬進行喂食，并對仔豬進行多次疫苗免疫，由于母體初乳中含有大量的抗體，可能會導致仔豬機體產生免疫，同時，進行疫苗免疫后也會產生抗體，產生抗體后的仔豬經HPS攻毒后可能會自行康復，難以復制HPS感染；HPS是一種寄居在豬上呼吸道部位的常見菌和機會性致病菌，母豬通常攜帶有HPS，因此會直接感染豬仔，影響建模效果。總之，普通級感染模型建立過程中存在較多影響因素，尤其是模型不穩定、結果不準確。

CDCD級感染模型建立時，仔豬是通過剖腹產得到的，對母豬實施剖腹產時，需要配備專業能力較強的外科手術醫生和嚴格的無菌手術室，成本較高，難以推廣。

SPF級感染模型建立時，需要使用HPS陰性豬，現在，HPS陰性豬群已很難找到，建模成本較高，操作難度較大，可靠性較低，難以推廣。

CD級感染模型建立時，仔豬經母豬自然分娩后立即與豬舍隔離，一方面隔絕了CD仔豬出生早期HPS在上呼吸道的定植，另一方面由于禁食初乳最大程度上避免了母體抗體的不利影響；建模期間不需要苛刻的無菌環境，飼養條件也相對寬松，操作較為簡單。所以CD仔豬是最適合作為HPS活體感染建模的實驗動物，綜合比較來看有望使得格拉澤氏病的復制更穩定、更現實、更可靠。

目前，Blanco等人所在的課題組(西班牙CISA)以及與之合作的PIC種豬公司和美國Minnesota大學相關課題組利用CD仔豬進行HPS感染建模。

現有的CD級感染模型建立時存在以下缺陷：

(1)CD仔豬喂養時，先使用牛初乳喂食3天，通常來講，牛初乳的獲得并不方便且需要做滅菌處理，不僅提高了實驗成本而且可能會因含有牛腸炎病毒增加CD仔豬腹瀉風險，CD仔豬的死亡率較高。

(2)已有模型對21日齡的CD仔豬進行攻毒，由于21日齡的CD仔豬體內器官發育尚不完善，相關實驗結果可能難以全面反映豬只感染HPS后的癥狀，準確度較低；同時，使用與生產上斷奶日齡(15～21日齡)相接近的CD仔豬進行實驗，不太符合動物福利的相關舉措。

(3)現有的CD仔豬至感染前存活率僅為50％～78.9％，存活率較低，實驗成本較高。

發明內容