[發明專利]一種副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法

有效

• 申請號: 201510011558.4
• 申請日: 2015-08-04
• 公開（公告）號: CN104488823A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 陳洪波;程蕾;趙書紅;張晶;向敏;侯永清;高其雙;郭玲;邱銀生;黎旺明
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K35/74
• 代理公司: 武漢智權專利代理事務所(特殊普通合伙) 42225
• 代理人: 彭程程;沈林華

1.一種副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將自然分娩得到的若干禁食母豬初乳CD仔豬進行隔離，飼養至18～25日齡，將未死亡的CD仔豬隨機均分為兩組：感染組A和對照組B；待感染組A和對照組B的所有CD仔豬生長至30～40日齡時，采集感染組A和對照組B中所有CD仔豬的鼻拭子和非抗凝外周血；判定鼻拭子中不存在副豬嗜血桿菌HPS病原、且非抗凝外周血中不含豬胸膜肺炎放線桿菌APP病原或APP血清抗體，轉入步驟二；

步驟二、待感染組A和對照組B的所有CD仔豬生長至40～70日齡時，向感染組A中所有CD仔豬的氣管內接種劑量為10⁷CFU～10⁹CFU、分散于培養基中的HPS細菌，得到攻毒組A′；接種HPS細菌的同時，向對照組B中所有CD仔豬氣管內注射與HPS劑量相同的培養基，得到空白組B′，轉入步驟三；

步驟三、接種HPS細菌1～20天后，分別提取攻毒組A′、空白組B′的肺臟組織的總DNA，當攻毒組A′的肺臟組織的總DNA中存在HPS病原、且空白組B′的肺臟組織的總DNA中不存在HPS病原時，建模成功；當攻毒組A′的肺臟組織的總DNA中不存在HPS病原，或空白組B′的肺臟組織的總DNA中存在HPS病原時，重新執行步驟一～步驟三。

2.如權利要求1所述的副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于，步驟一中所述將自然分娩得到的若干CD仔豬進行隔離，養殖至18～25日齡包括以下步驟：母豬自然分娩時人工助產，防止仔豬分娩后接觸母豬、地面、欄舍及其他豬場物品，立即放入溫度為33～35℃的無菌保溫箱中，待CD仔豬體表干燥、保溫箱內站立穩定或行走自如后，使用奶瓶飼喂溫度為37℃的溫開水約40ml，出生后3～5h內，將CD仔豬轉移至實驗動物中心負壓條件下，溫度為28～35℃的仔豬保育欄中；

CD仔豬的1～12日齡均喂食人工乳，其中：1～2日齡每日喂食次數為5次，3～4日齡每日喂食4次，5～14日齡每日喂食3次；每次的喂食量根據日齡的增長逐漸增加；CD仔豬自13日齡起，采用人工乳并輔助顆粒飼料喂食，其中：15～21日齡每日喂食3次，22日齡后自由采食顆粒飼料和飲水，養殖至18～25日齡時，CD仔豬的存活率為80％～85％。

3.如權利要求2所述的副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于：自CD仔豬7日齡起開始訓練采食顆粒料，CD仔豬13日齡后強制性在人工乳中添加CD仔豬顆粒料，首次添加量為：每升流食中含人工乳粉112g、顆粒料28g，之后按照顆粒料每日5～10％的比例遞加，對應人工乳粉以5～10％的比例減少。

4.如權利要求1所述的副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于：步驟一中將自然分娩得到的若干禁食母豬初乳CD仔豬進行隔離，飼養至18～25日齡，包括以下步驟：將CD仔豬飼養至3日齡后，判定CD仔豬拉稀，根據CD仔豬的體重，自發現日起，連續3天，向對應CD仔豬早晚分別注射50μl/kg的土霉素注射液和頭孢噻呋鈉注射液，并每天灌食糖鹽水，每升糖鹽水中含20g葡萄糖、3.5g氯化鈉和2.5g碳酸氫鈉。

5.如權利要求1所述的副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于，步驟一中所述采集感染組A和對照組B中所有CD仔豬的鼻拭子和非抗凝外周血之后，還包括以下步驟：判定鼻拭子中存在HPS病原、且非抗凝外周血中含有APP病原或者非抗凝外周血含有APP血清抗體，將對應的CD仔豬移除，轉到步驟二。

6.如權利要求1所述的副豬嗜血桿菌感染仔豬模型的構建方法，其特征在于，步驟二和步驟三之間還包括以下步驟：觀察攻毒組A′、空白組B′中所有CD仔豬的行為舉止、呼吸、跛行、關節腫脹、神經癥狀、咳嗽和進食情況；

采集所有攻毒組A′和空白組B′中CD仔豬的外周血，檢測所有外周血的血液參數；攻毒1～20天，后將攻毒組A′、空白組B′中所有CD仔豬麻醉并放血，采集每頭CD仔豬的頸部淋巴結、腹股溝淋巴結、腹膜、腸系膜淋巴結、肝、脾、腎、肺臟、心、腦膜和大腦組織；并對腹膜、脾臟、心臟、肺臟、腦膜、大腦組織進行切片并染色觀察。