[發(fā)明專利]一種埃博拉病毒分型熒光PCR檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510011389.4
• 申請日: 2015-01-09
• 公開（公告）號: CN104711370A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 戴立忠;李勃;劉佳;陳曉亮;鄧中平
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙七合源專利代理事務(wù)所(普通合伙) 43214
• 代理人: 歐穎;吳婷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種埃博拉病毒分型熒光PCR檢測試劑盒。

背景技術(shù)

埃博拉病毒(EBOV)屬絲狀病毒科(Filiviridae)，為不分節(jié)段的單股負鏈RNA病毒。病毒呈長絲狀體，可呈桿狀、絲狀、“L”形等多種形態(tài)。毒粒長度平均1000nm，直徑70-90nm。病毒有脂質(zhì)包膜，包膜上有呈刷狀排列的突起，主要由病毒糖蛋白組成。埃博拉病毒基因組是不分節(jié)段的負鏈RNA，大小為18.9kb，編碼7個結(jié)構(gòu)蛋白和1個非結(jié)構(gòu)蛋白。

EBOV可在人、猴、豚鼠等哺乳類動物細胞中增殖，其中Vero-98、Vero-E6、Hela-229細胞最敏感。病毒接種后，6-7小時出現(xiàn)細胞病變，表現(xiàn)為細胞圓化、皺縮，細胞質(zhì)內(nèi)可見纖維狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)的包含體。給獼猴接種埃博拉病毒后可產(chǎn)生與人類疾病相似的癥狀體征并引起死亡。在鳥類、爬行類、節(jié)肢動物和兩棲類動物細胞內(nèi)不能復(fù)制，在倉鼠與豚鼠中，需多次傳代才能引起死亡。

埃博拉病毒包括五種亞型：扎伊爾型、蘇丹型、本迪布焦型、塔伊森林型、萊斯頓型。前四種亞型埃博拉病毒已證實能夠致人類疾病。不同亞型毒力不同，扎伊爾型毒力強，人感染后病死率高，蘇丹型次之，本迪布焦型更次，塔伊森林型對黑猩猩有致死性，但對人的毒力較弱。萊斯頓型對非人靈長類動物有致死性，而人感染后不發(fā)病。不同亞型病毒糖蛋白的基因組核苷酸構(gòu)成差異較大(同源性為34％-43％)，但同一亞型的病毒基因組相對穩(wěn)定，遺傳特性很少發(fā)生變化。

埃博拉出血熱(Ebola?feve)是由埃博拉病毒(Ebola?virus,EBOV)引起的一種急性出血性傳染病。主要通過接觸病人或感染動物的血液、體液、分泌物和排泄物等而感染，臨床表現(xiàn)主要為突起發(fā)熱、出血和多臟器損害。埃博拉出血熱病死率高，可達50％-90％。本病于1976年在非洲首次發(fā)現(xiàn)，主要在烏干達、剛果、加蓬、蘇丹、科特迪瓦、南非、幾內(nèi)亞、利比里亞、塞拉利昂、尼日利亞等非洲國家流行。

接觸傳播是本病最主要的傳播途徑。病人或動物的血液及其他體液、嘔吐物、分泌物、排泄物(如尿、糞便)等均具有高度的傳染性，可以通過接觸病人和亞臨床感染者(特別是血液、排泄物及其他污染物)而感染。病人自急性期至死亡前血液中均可維持很高的病毒含量，醫(yī)護人員在治療、護理病人時、或處理病人尸體過程中容易受到感染，病人的轉(zhuǎn)診還可造成醫(yī)院之間的傳播。醫(yī)院內(nèi)傳播是導(dǎo)致埃博拉出血熱暴發(fā)流行的重要因素。此外，吸入感染性的分泌物、排泄物、未經(jīng)消毒的注射器等也可造成感染。

本病潛伏期為2-21天，一般為5-12天。感染埃博拉病毒后可不發(fā)病或呈輕型，非重病患者發(fā)病后2周逐漸恢復(fù)。典型病例為急性起病，臨床表現(xiàn)為高熱、畏寒、頭痛、肌痛、惡心、結(jié)膜充血及相對緩脈。發(fā)病2-3天后可有惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、粘液便或血便等表現(xiàn)，半數(shù)病人可有咽痛及咳嗽。病后4-5天進入極期，發(fā)熱持續(xù)并出現(xiàn)神志的改變，如譫妄、嗜睡等。重癥病人在發(fā)病數(shù)日可出現(xiàn)不同程度的出血傾向，有咯血，鼻、口腔、結(jié)膜、胃腸道、陰道及皮膚出血或血尿，病后第10日為出血高峰，50％以上的患者出現(xiàn)嚴重的出血，并可因出血、肝腎功能衰竭及致死性并發(fā)癥而死亡。病人最顯著的表現(xiàn)為低血壓、休克和面部水腫，還可出現(xiàn)DIC、電解質(zhì)和酸堿的平衡失調(diào)等。90％的死亡患者在發(fā)病后12天內(nèi)死亡(7-14天)。急性期并發(fā)癥有心肌炎、細菌性肺炎等。由于病毒持續(xù)存在于精液中，也可引起睪丸炎、睪丸萎縮等遲發(fā)癥。在病程第5-7日可出現(xiàn)麻疹樣皮疹，以肩部、手心和腳掌多見，數(shù)天后消退并脫屑，部分患者可較長期地留有皮膚的改變。目前對埃博拉出血熱尚缺乏特效治療方法，主要是對癥和支持治療。

臨床早期診斷埃博拉出血熱相當(dāng)困難，因其癥狀無特殊性，不易與其他病毒性出血熱如拉沙熱、黃熱病、馬爾堡出血熱、克里米亞－剛果出血熱、腎綜合征出血熱等鑒別。可以參考這些疾病的流行病學(xué)特點，主要是流行地區(qū)、流行季節(jié)等進行鑒別。確診主要依靠實驗室檢測，具體方法如下：

(一)血清學(xué)檢測

患者最早可在癥狀出現(xiàn)后7-10天從血清中檢出特異性IgM、IgG抗體，IgM抗體可維持3個月，IgG抗體可維持很長時間。多數(shù)患者抗體出現(xiàn)于起病后10-14天，也有重癥病人至死也未能檢出抗體，故IgG抗體檢測主要用于血清流行病學(xué)調(diào)查，IgM抗體可作為近期感染的血清流行病學(xué)調(diào)查指標(biāo)，但不能滿足早期診斷的需要。血清特異性IgM抗體多采用IgM捕捉ELISA法檢測；血清特異性IgG抗體多采用ELISA、免疫熒光等方法檢測。

(二)病原學(xué)檢測