[發(fā)明專利]一種埃博拉病毒分型熒光PCR檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510011389.4
• 申請(qǐng)日: 2015-01-09
• 公開（公告）號(hào): CN104711370A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴立忠;李勃;劉佳;陳曉亮;鄧中平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙七合源專利代理事務(wù)所(普通合伙) 43214
• 代理人: 歐穎;吳婷

1.一種埃博拉病毒分型熒光PCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括檢測(cè)扎伊爾型埃博拉病毒的引物探針序列的一種PCR反應(yīng)液和含磁珠的RNA提取溶液，且所述引物探針序列為：

扎伊爾型上游引物：5’-TGGTGATTTTCCGTTTGATGC-3’；

扎伊爾型下游引物：5’-AAACGAGCTTGAGCCACTGAAT-3’；

扎伊爾型探針：5’FAM-TTGAAATCACAGCATCGTTGGCATC-BHQ13’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括檢測(cè)蘇丹型埃博拉病毒的引物探針序列的一種PCR反應(yīng)液，且所述引物探針序列為：

蘇丹型上游引物：5’-TCCTTTTACAAGCCTAAGATTCCAT-3’；

蘇丹型下游引物：5’-GCATAGGTCGCTAAACACAACTCC-3’；

蘇丹型探針：5’FAM-TTGCTCTAGCTCCCGTTTTGGTGTTAC-BHQ13’。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括檢測(cè)塔伊森林型埃博拉病毒和檢測(cè)本迪布焦型埃博拉病毒的引物探針序列的兩種PCR反應(yīng)液，且所述引物探針序列為：

塔伊森林型上游引物：5’-CCCATCTCCGCCCACAA-3’；

塔伊森林型下游引物：5’-GAGTGGAATCCTCTGAAACCAATT-3’；

塔伊森林型探針：5’FAM-CACGCAGGCGAAGACCACAAAGA-BHQ13’；

本迪布焦型上游引物：5’-CTTTCATCCCAAACTGAGACCTATC-3’；

本迪布焦型下游引物：5’-CATTATTGCTTGTATTTTATCAGGAGAG-3’；

本迪布焦型探針：5’FAM-ATTGCCAGGGAAGACCGGGAAA-BHQ13’。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包含內(nèi)標(biāo)序列，以及在所述PCR反應(yīng)液中還包含檢測(cè)內(nèi)標(biāo)的引物探針序列，

內(nèi)標(biāo)序列為：5’-GTCGACCTGGATGCCCGAATCGTAGCTAGGCCCTAAAATTTCGGCTCGATCCCGAAAGGTCCCAAACGTCTAGCAGTCAATGCGCTAGCGCCCATTAGCAATTAC-3’；

內(nèi)標(biāo)上游引物：5’-TGGATGCCCGAATCGTAGCT-3’；

內(nèi)標(biāo)下游引物：5’-CATTGACTGCTAGACGTTTGGGA-3’；

內(nèi)標(biāo)探針：5’HEX-CCCTAAAATTTCGGCTCGATCCCG-BHQ13’。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包含如下組分，

RNA提取溶液Ⅰ：包含十二烷基硫酸鈉、曲拉通、異硫氰酸胍和100～400μg/ml的磁珠；

RNA提取溶液Ⅱ：含4-羥乙基哌嗪乙磺酸和氯化鈉；

RNA提取溶液Ⅲ：含曲拉通和氯化鈉；

RNA提取溶液Ⅳ：含礦物油。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包含如下組分，

RNA洗脫液：含Tris-HCl和EDTA；

RT-PCR增強(qiáng)劑：Mn(OAc)2濃度為100～500mmol/L的水溶液。