[發明專利]一種核酸的轉座酶打斷一站式處理方法及試劑

有效

• 申請號: 201480082159.0
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN107075560B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: 耿春雨;郭榮榮;陳若瑩;張迎新;安德烈·阿萊克謝耶夫;蔣慧;章文蔚
• 申請（專利權）人: 深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 彭家恩;羅瑤

1.一種核酸的轉座酶打斷一站式處理方法，包括如下步驟：

使用轉座酶包埋復合體對核酸進行隨機打斷，其中所述轉座酶包埋復合體包含轉座酶和含轉座酶識別序列的第一接頭；

加入第一試劑進行處理，打破所述轉座酶與所述核酸的靶序列的吸附作用；

加入第二試劑進行處理，減弱所述第一試劑對后續酶促反應的影響；

以所述第二試劑處理后的產物為模板成分進行PCR反應，得到打斷的核酸片段兩端連接有接頭的PCR產物；

其中所述第一試劑包含SDS溶液；

其中所述第二試劑包含Triton-X100溶液，并且還包含吐溫-20溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在加入第二試劑進行處理之后并且在進行PCR反應之前還包括：通過連接酶在缺口處連接上第二接頭，其中所述缺口是在打斷的核酸兩端連接所述第一接頭后形成的9bp堿基缺失。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述第二接頭的3’端為雙脫氧核苷酸，以防止所述第二接頭與所述第一接頭互連。

4.一種核酸的轉座酶打斷一站式處理試劑，包括如下組成部分：

第一試劑，包含SDS溶液，用于打破所述轉座酶與所述核酸的靶序列的吸附作用；

第二試劑，包含Triton-X100溶液和吐溫-20溶液，用于減弱所述第一試劑對后續酶促反應的影響；

還包括：

轉座酶和含轉座酶識別序列的第一接頭，用于形成轉座酶包埋復合體以對核酸進行隨機打斷；

還包括：

PCR組分，用于以所述第二試劑處理后的產物為模板成分進行PCR反應。

5.根據權利要求4所述的試劑，其特征在于，所述試劑還包括：

第二接頭組分，用于連入打斷的核酸兩端連接所述第一接頭后形成的缺口處：

連接酶組分，用于在打斷的核酸兩端連接所述第一接頭后形成的缺口處連接上第二接頭。