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[發(fā)明專利]用于卵巢卵泡生長和成熟的方法在審

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 201480079191.3 申請日: 2014-03-27
公開(公告)號: CN107073036A 公開(公告)日: 2017-08-18
發(fā)明(設計)人: 喬納森·李·泰利;多麗·庫辛士·活士 申請(專利權)人: 東北大學
主分類號: A61K35/12 分類號: A61K35/12;A61K35/54
代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001 代理人: 權陸軍,楊思捷
地址: 美國馬*** 國省代碼: 暫無信息
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 用于 卵巢 卵泡 生長 成熟 方法
【說明書】:

政府支持

本技術在由National Institutes of Health授予的資助R37-AG012279和F32-AG034809下由美國政府支持完成。美國政府在本技術中具有某些權利。

背景

由小鼠胚胎干細胞(ESC)體外形成的卵泡樣結構由單一卵母細胞樣細胞組成,其可以生長至直徑70 μm大小,由一層或多層緊密附著的體細胞所環(huán)繞。與在卵巢內正常卵泡形成過程中所觀察到的類似,ESC來源的卵泡樣結構內的體細胞經(jīng)胞間橋與其封閉的生殖細胞連接,其可以用于促進正常卵泡發(fā)育所需的細胞與細胞的相互作用。

概述

在一方面,本技術提供促進個體中哺乳動物卵母細胞的生長和成熟的方法。所述方法包括:將哺乳動物多能細胞工程改造以包含顆粒細胞特異性報告分子,其中所述顆粒細胞特異性報告分子的表達指示作為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的細胞,將哺乳動物多能細胞在適合于所述多能細胞分化為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的條件下體外培養(yǎng),基于顆粒細胞特異性報告分子的表達分離顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群,并將顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸,其中所述哺乳動物卵巢組織包含卵泡和/或不成熟卵母細胞,其中顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞促進卵泡和/或不成熟卵母細胞的生長和成熟。

在一些實施方案中,顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的群和哺乳動物卵巢組織是自體的。

在一些實施方案中,哺乳動物卵巢組織是人的。

在一些實施方案中,顆粒細胞特異性報告分子包括在卵巢顆粒細胞特異性基因控制下的熒光報告分子。

在一些實施方案中,卵巢顆粒細胞特異性基因選自:叉頭框L2 (Foxl2)、無翼型MMTV整合位點家族成員4 (WNT4)、Nr5a1、Dax-1、ATP-結合盒亞家族9 (Abca9)、乙酰輔酶A酰基轉移酶2 (線粒體3-氧代酰基-輔酶A硫解酶; Acaa2)、肌動蛋白α2(平滑肌、主動脈)(Acta2)、具有1型凝血酶基序的解整聯(lián)蛋白樣和金屬肽酶(reprolysin樣)17 (Adamts17)、ADAMTS-樣2 (Adamtsl2)、AF4/FMR2家族成員1 (Aff1)、表達序列AI314831 (AI314831)、醛酮還原酶家族1成員C14 (Akr1c14)、醛酮還原酶家族1、Notch2以及成員C樣(Akr1cl)。

在一些實施方案中,熒光報告分子選自:DsRed、綠色熒光蛋白(GFP)、黃色熒光蛋白(YFP)和橙色熒光蛋白(OFP)。

在一些實施方案中,將顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸先體外后體內(ex vivo)進行。在一些實施方案中,將顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸體內(in vivo)進行。

在一些實施方案中,哺乳動物多能細胞選自:胚胎干細胞(ESC)、誘導多能干細胞(iPSC)、骨髓來源的細胞和外周血來源的細胞。

在另一方面,本技術提供在有需要的個體中提高一種或多種甾體激素水平的方法。所述方法包括:將多個哺乳動物多能細胞工程改造以包含顆粒細胞特異性報告分子,其中所述顆粒細胞特異性報告分子的表達指示作為顆粒細胞或顆粒細胞前體的細胞,將多個哺乳動物多能細胞在適合于所述哺乳動物多能細胞分化為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的條件下體外培養(yǎng),基于顆粒細胞特異性報告分子的表達分離顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群,并將有效量的顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群施用給個體,其中所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞分泌一種或多種甾體激素,且其中施用顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群之后,所述個體相比于施用所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經(jīng)富集的群之前的個體展示出一種或多種甾體激素的水平升高。

在一些實施方案中,所述方法還包括刺激顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞以分泌甾體激素。

在一些實施方案中,甾體激素選自:雌二醇、雌三醇、雌酮、孕烯醇酮和黃體酮。

在一些實施方案中,通過卵泡刺激激素(FSH)、8-溴腺苷3′,5′-環(huán)單磷酸 (8-br-cAMP)和黃體化激素(LH)刺激顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞以分泌甾體激素。

在一些實施方案中,顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的群對于個體是自體的。

在一些實施方案中,個體是人。

在一些實施方案中,顆粒細胞特異性報告分子包括在卵巢顆粒細胞特異性基因控制下的熒光報告分子。

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