[發明專利]用于卵巢卵泡生長和成熟的方法

在審

• 申請號: 201480079191.3
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN107073036A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 喬納森·李·泰利;多麗·庫辛士·活士
• 申請（專利權）人: 東北大學
• 主分類號: A61K35/12
• 分類號: A61K35/12;A61K35/54
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 權陸軍,楊思捷

1.促進個體中哺乳動物卵母細胞的生長和成熟的方法，所述方法包括：

將多個哺乳動物多能細胞工程改造以包含顆粒細胞特異性報告分子，其中所述顆粒細胞特異性報告分子的表達指示作為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的細胞；

在適合于所述哺乳動物多能細胞分化為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的條件下，體外培養所述多個哺乳動物多能細胞；

基于所述顆粒細胞特異性報告分子的表達，分離顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群；以及

使所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸，其中所述哺乳動物卵巢組織包含卵泡和/或未成熟卵母細胞，其中所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞促進所述卵泡和/或所述未成熟卵母細胞的生長和成熟。

2.權利要求1的方法，其中所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的群和所述哺乳動物卵巢組織是自體的。

3.權利要求1的方法，其中所述哺乳動物卵巢組織是人的。

4.權利要求1的方法，其中所述顆粒細胞特異性報告分子包括在卵巢顆粒細胞特異性基因控制下的熒光報告分子。

5.權利要求4的方法，其中所述卵巢顆粒細胞特異性基因選自：叉頭框L2 (Foxl2)、無翼型MMTV整合位點家族成員4 (WNT4)、Nr5a1、Dax-1、ATP-結合盒亞家族9 (Abca9)、乙酰輔酶A酰基轉移酶2 (線粒體3-氧代酰基-輔酶A硫解酶; Acaa2)、肌動蛋白α2（平滑肌、主動脈）(Acta2)、具有1型凝血酶基序的解整聯蛋白樣和金屬肽酶（reprolysin樣）17 (Adamts17)、ADAMTS-樣2 (Adamtsl2)、AF4/FMR2家族成員1 (Aff1)、表達序列AI314831 (AI314831)、醛酮還原酶家族1成員C14 (Akr1c14)、醛酮還原酶家族1、Notch2以及成員C樣(Akr1cl)。

6.權利要求4的方法，其中所述熒光報告分子選自：海葵種(Discosoma sp.)紅（DsRed）、綠色熒光蛋白(GFP)、黃色熒光蛋白(YFP)和橙色熒光蛋白(OFP)。

7.權利要求1的方法，其中將所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸先體外后體內進行。

8.權利要求1的方法，其中將所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群與哺乳動物卵巢組織接觸體內進行。

9.權利要求1的方法，其中所述哺乳動物多能細胞選自：胚胎干細胞（ESC）、誘導多能干細胞（iPSC）或其他重編程體細胞、骨髓來源的細胞和外周血來源的細胞。

10.提高有需要的個體中一種或多種甾體激素的水平的方法，所述方法包括：

將多個哺乳動物多能細胞工程改造以包含顆粒細胞特異性報告分子，其中所述顆粒細胞特異性報告分子的表達指示作為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的細胞；

在適合于所述哺乳動物多能細胞分化為顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的條件下，體外培養所述多個哺乳動物多能細胞；

基于所述顆粒細胞特異性報告分子的表達，分離顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群；以及

向所述個體施用有效量的所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群，其中所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞分泌一種或多種甾體激素，且其中施用所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群之后，所述個體相比于施用所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞經富集的群之前的個體展示出一種或多種甾體激素的水平升高。

11.權利要求10的方法，其還包括刺激所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞以分泌甾體激素。

12.權利要求10-11中任一項的方法，其中所述甾體激素選自：雌二醇、雌三醇、雌酮、孕烯醇酮和黃體酮。

13.權利要求11的方法，其中通過卵泡刺激激素（FSH）、8-溴腺苷3′,5′-環單磷酸 (8-br-cAMP)和黃體化激素（LH）刺激所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞以分泌甾體激素。

14.權利要求10的方法，其中所述顆粒細胞或顆粒細胞前體細胞的群對于所述個體是自體的。

15.權利要求10的方法，其中所述個體是人。