[發(fā)明專(zhuān)利]用于柑橘綠化枯萎病的發(fā)病定量系統(tǒng)和治療方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480062637.1
• 申請(qǐng)日: 2014-10-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105722977A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 小羅伯特·M·勞埃德
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 綠色生活生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2013年10月30號(hào)提交的題為“PathogenesisQuantificationSystemsandTreatmentMethodsforCitrusGreeningBlight”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列No.61/897,626的優(yōu)先權(quán)，所述申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容以引用的方式并入本文。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明尤其涉及對(duì)宿主植物和哺乳動(dòng)物致病的噬菌體和細(xì)菌的檢測(cè)和控制。

本發(fā)明在柑橘綠化枯萎病(citrusgreeningblight)(也稱(chēng)為黃龍病)(HLB)的背景下進(jìn)行例示，并且更通常涉及基于根據(jù)雙病原體：多重宿主定量比率或發(fā)病四分位數(shù)測(cè)定致病指數(shù)的測(cè)試和治療方法及組合物，所述致病指數(shù)被專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于四分位數(shù)的診斷和治療，其次用于藥物開(kāi)發(fā)，并且作為用于鑒定藥物候選物的研究工具。

發(fā)明背景

柑橘綠化枯萎病(也稱(chēng)為黃龍病(HLB))是遍及世界的柑橘植物的致死疾病，其導(dǎo)致被感染的樹(shù)的顯著果實(shí)損失和死亡。HLB感染影響樹(shù)的葉片、椏枝和果實(shí)，最終導(dǎo)致整個(gè)樹(shù)的衰退。HLB的癥狀包括具疤斑、具斑駁并具黃化脈紋的葉片，歪斜且小的綠色咸苦味果實(shí)，椏枝梢枯，以及整個(gè)樹(shù)發(fā)育遲緩并衰退。HLB的診斷由于下述事實(shí)而變得復(fù)雜：HLB的一些癥狀與其它的樹(shù)小病(包括營(yíng)養(yǎng)缺乏)的癥狀類(lèi)似。HLB控制常常需要破壞被感染的樹(shù)，所述被感染的樹(shù)可能甚至在被感染后數(shù)年也不顯示HLB的癥狀。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)診斷試驗(yàn)已鑒定出與HLB的癥狀相關(guān)聯(lián)的主要病原體為細(xì)菌候選韌皮部桿菌屬某些種(CandidatusLiberibacterspp)，包括候選韌皮部桿菌亞洲種(Ca.L.asiaticus)(LAS)、候選韌皮部桿菌非洲種(Ca.L.africanus)和候選韌皮部桿菌美洲種(Ca.L.americanus)物種。據(jù)信細(xì)菌損害營(yíng)養(yǎng)素在柑橘樹(shù)的韌皮部和葉莖中的傳遞，其中懷疑植物病狀是由營(yíng)養(yǎng)缺乏所引起。假定的致病細(xì)菌的抗生素控制是被動(dòng)的解決方案，但對(duì)果園管理來(lái)說(shuō)是昂貴的手段，其絕不可能是合理的解決方案。柑橘中的候選韌皮部桿菌的低復(fù)制水平需要高靈敏度方法來(lái)檢測(cè)它們的存在。已用來(lái)檢測(cè)候選韌皮部桿菌亞洲種細(xì)菌的基于PCR的方法包括定性PCR測(cè)定(Saponari等,2013,J.Virol.Methods.193(2):478-86)和組織印跡診斷(Nageswara-RaoM.等,2013,Mol.CellProbes.27(5-6):176-83)，所述文獻(xiàn)中的每個(gè)以引用的方式并入本文。

細(xì)菌噬菌體或噬菌體是感染細(xì)菌的病毒。大多數(shù)是DNA病毒。每種噬菌體僅攻擊特定物種或者在許多情況下僅攻擊物種中的某些菌株。在結(jié)構(gòu)上，細(xì)菌噬菌體或噬菌體由多邊形的頭部和短直的尾部構(gòu)成，所述頭部由薄蛋白膜包裹的DNA組成，所述尾部由蛋白質(zhì)組成。然而，也已報(bào)道球形噬菌體和絲狀噬菌體。細(xì)菌噬菌體的生活周期包括兩個(gè)周期：營(yíng)養(yǎng)周期和溶源性周期。在營(yíng)養(yǎng)周期中，噬菌體被稱(chēng)為烈性噬菌體，并且所述周期包括附著(吸附)、穿入、隱蔽期、復(fù)制、組裝和釋放的步驟。在溶源性周期中，噬菌體被稱(chēng)為溫和噬菌體，并且所述周期包括附著(吸附)、穿入、隱蔽期的步驟，并且隨后與營(yíng)養(yǎng)周期中的烈性噬菌體不同，溫和噬菌體在隱蔽期之后不復(fù)制，相反，其整合到細(xì)菌染色體中并且潛伏一段時(shí)間。整合的噬菌體現(xiàn)被稱(chēng)為原噬菌體，并且攜帶原噬菌體的細(xì)菌被稱(chēng)為溶源體。溶源體不被溶解，而是與作為染色體的一部分的原噬菌體一起生長(zhǎng)和增殖。溶源體可獲得新的特性，并且原噬菌體可恢復(fù)成烈性噬菌體并且被感染的細(xì)菌可以被溶解。細(xì)菌噬菌體的實(shí)際應(yīng)用包括但不限于細(xì)菌噬菌體分型、將細(xì)菌分類(lèi)為噬菌體群、噬菌體溶源性轉(zhuǎn)換、噬菌體療法以及作為克隆載體。