[發明專利]用于柑橘綠化枯萎病的發病定量系統和治療方法

無效

• 申請號: 201480062637.1
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN105722977A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 小羅伯特·M·勞埃德
• 申請（專利權）人: 綠色生活生物技術有限責任公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

1.一種用于檢測生物樣品中的發病的方法，其包括：

a)定量所述樣品中對第一生物體具有特異性的核酸的量，所述第一生物體為與第二生物體相關聯的病原體，其中所述第一生物體和所述第二生物體接連地感染宿主生物體以確定病原體定量測量值，

b)定量所述樣品中對響應于病原體的所述宿主生物體具有特異性的核酸的量以確定與疾病的所述病原體相關聯的靶標的多重定量；以及

c)計算雙病原體靶標的量相對于宿主定量測量值的比率，其中所述比率提供了用于檢測發病的病原體指數。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述病原體指數指示所述發病的預后或者可用于藥物治療效力和藥物篩選。

3.如權利要求1所述方法，其中通過使來自所述樣品的所述核酸與核酸擴增反應中的第一組寡核苷酸引物接觸來進行所述樣品中的對所述第一生物體具有特異性的所述核酸的定量，所述第一組寡核苷酸與所述第一生物體的核酸至少部分互補，并且其中通過使來自所述樣品的所述核酸與核酸擴增反應中的第二組寡核苷酸引物接觸來進行所述樣品中的對所述第二生物體具有特異性的所述核酸的定量，所述第二組寡核苷酸與所述第二生物體的核酸至少部分互補，并且其中通過使來自所述樣品的所述核酸與核酸擴增反應中的第三組寡核苷酸引物接觸來進行所述樣品中的對所述第三宿主生物體具有特異性的所述核酸的定量，所述第三組寡核苷酸與所述第三生物體的核酸至少部分互補，并且還包括檢測來自所述核酸擴增反應的擴增子，還包括

檢測來自所述核酸擴增反應的擴增子，其中所述擴增反應可發生在同一容器中，以及

基于擴增子的相對數目來計算病原體比率的量相對于宿主負載量的比率以導出致病指數或四分位數。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述病原生物體是病毒或細菌。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述宿主生物體是細菌、植物或動物。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述發病是柑橘綠化枯萎病或黃龍病(HLB)。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述宿主生物體是候選韌皮部亞洲種(LAS)。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述病原生物體選自由以下組成的組：噬菌體、病毒和任何與LAS在致病上聯系的誘導物或因子基因。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述第二生物體是細菌噬菌體。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述細菌噬菌體選自由SC1、SC2和SC3溶菌噬菌體組成的組的溶菌噬菌體。

11.如權利要求1所述的方法，其中所述核酸是RNA或DNA。

12.如權利要求3所述的方法，其中所述核酸擴增反應是實時PCR、重組酶聚合酶擴增(RPA)、螺旋酶依賴性擴增(HAD)、環介導的等溫擴增(LAMP)和切口酶擴增反應(NEAR)。

13.如權利要求1所述的方法，其還包括與提供作為治療策略的臨床效用或藥物篩選的病原體指數或四分位數相關的報告算法或指數。

14.如權利要求13所述的方法，其還包括下述步驟：定量所述樣品中對所述病原生物體的誘導物具有特異性的核酸的量以確定誘導物負載量；并且其中所述病原體指數和所述誘導物負載量與用于確定預后和提供作為治療策略的臨床效用或藥物篩選的所述報告指數相關。

15.如權利要求14所述的方法，其中對所述病原生物體、所述宿主生物體或所述誘導物具有特異性的多種獨特核酸被定量，并且在所述報告指數中是相關的。