[發(fā)明專利]未經(jīng)處理的核酸樣本的直接量化

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480056726.5
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN105637100B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設計）人: J·Y·劉
• 申請（專利權(quán)）人: 生命技術(shù)公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/686
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.一種用于在不先前應用提取技術(shù)的情況下對DNA的存在進行直接量化以用于短串聯(lián)重復(STR)分析的方法，其包括：

在收集用于刑事偵查的證據(jù)中使認為曾由嫌疑犯觸碰的物品與紙張接觸以收集由所述嫌疑犯留在所述物品上的任何殘余核酸，

將所述紙張存放到容器中，

在所述容器內(nèi)進行實時聚合酶鏈反應(real-time polymerase chain reaction，rtPCR)以及在rtPCR期間檢測從所述容器發(fā)射的熒光水準，其中所述熒光水準在所述紙張?zhí)幱谒鋈萜髦袝r通過電荷耦合裝置來加以檢測，和

通過將所述熒光水準與由所述嫌疑犯留在所述物品上的核酸的量相關來確定由所述嫌疑犯留在所述物品上的核酸的量，其中所述紙張沒有經(jīng)過核酸提取技術(shù)，

使用直接量化結(jié)果來確定用于STR分析的輸入DNA的量，和

任選地進行直接STR擴增。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中認為曾由嫌疑犯觸碰的物品具有指紋。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中用于所述rtPCR中的粘接和延伸溫度相同。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述rtPCR是多重rtPCR。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述熒光檢測包含使用選自以下的熒光報告探針：SYBR綠、Taqman探針、分子信標、Scorpion引物、Sunrise引物以及Eclipse探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述熒光報告探針與淬滅劑偶合。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述紙張的面積等于或小于直徑為3mm的圓形的面積，其中所述紙張的面積等于或小于直徑為2mm的圓形的面積，或者其中所述紙張的面積等于或小于直徑為1mm的圓形的面積。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中由所述嫌疑犯留在所述物品上的殘余核酸存在于血液、血漿、血清、唾液、汗液、陰道分泌物、精液、組織、尿液、腦脊髓液中，或者由所述嫌疑犯留在所述物品上的殘余核酸是觸碰核酸。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述紙張含有纖維，所述纖維選自纖維素纖維、來自茅草(Esparto grass)、甘蔗渣、粗毛(kemp)、亞麻的纖維、人造絲(rayon)、聚乙烯、聚丙烯、含羥基纖維及其混合物。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述紙張是濾紙，其中所述濾紙是Whatman903、Ahlstrom級別226和MunktellTFN。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中在將濾紙存放到容器中之前，將弱堿、螯合劑、洗滌劑吸收到所述濾紙中。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其還包括在內(nèi)部PCR對照合成DNA序列的存在下進行rtPCR。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中rtPCR反應包括確定個體的性別，由所述嫌疑犯留在所述物品上的殘余核酸來源于所述個體。