[發(fā)明專利]經(jīng)處理的濾器

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480055163.8
• 申請(qǐng)日: 2014-10-07
• 公開（公告）號(hào): CN105612250A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·陳;K·墨菲;P·J·賽澤;A·紐曼;B·羅斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾華股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/02
• 分類號(hào): C12N7/02
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;楊昀

相關(guān)申請(qǐng)

該國際申請(qǐng)要求2013年10月7日提交的歐洲申請(qǐng)?zhí)?3187628的優(yōu)先權(quán)，其 全文通過引用納入本文。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種過濾包含蛋白質(zhì)的流體的方法。本發(fā)明還涉及用于該方法 的經(jīng)處理的濾器和由該方法得到的濾液。

背景技術(shù)

在蛋白質(zhì)物質(zhì)的加工期間，通常需要使用過濾步驟。這一過濾步驟能夠去 除將對(duì)最終產(chǎn)物不利的組分。例如，通過選擇合適孔徑的濾器，可能從病毒顆 粒的大聚集體中分離游離的、完整病毒顆粒。

EP0188104B1描述了通過裝置如含有濾器的心切開術(shù)儲(chǔ)器過濾血液產(chǎn)品。 已經(jīng)用聚山梨酯80處理濾器，其改善了通過裝置的血液的重力流。然而，該技 術(shù)限于血液過濾并且沒有公開純化治療性蛋白質(zhì)，如用于疫苗的病毒蛋白質(zhì)或 病毒粒子。EP0188104并沒有使用過濾來從感興趣的蛋白質(zhì)中去除大蛋白質(zhì)聚 集體。此外，EP0188104需要在使用之前干燥濾器，這在本發(fā)明中不需要。

WO/2011/051235描述了加入叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(TRITON)以增加流感疫苗制造中的過濾性能。然而，在WO/2011/051235中，曲通加入病毒制備物中而不是用于預(yù)處理濾器。此外，在WO/2011/051235中，是在裂解之后和滅活之前加入。在本發(fā)明的情況中，優(yōu)選在裂解之前使用經(jīng)去污劑處理的濾器。

發(fā)明內(nèi)容

在病毒產(chǎn)品的制備中，蛋白質(zhì)物質(zhì)的過濾、產(chǎn)物無菌性和安全性是關(guān) 鍵的。采用滅活步驟來殺死感染性物質(zhì)。通常，滅活劑，如甲醛通過誘導(dǎo) 蛋白質(zhì)物質(zhì)的交聯(lián)來殺死感染性復(fù)制機(jī)構(gòu)，也可能產(chǎn)生聚集的蛋白質(zhì)。已 經(jīng)發(fā)現(xiàn)過濾包含蛋白質(zhì)物質(zhì)的流體是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。例如，盡管進(jìn)行過濾和 純化步驟，仍觀察到所需產(chǎn)品的量的明顯減少，即使在預(yù)期蛋白質(zhì)物質(zhì)的 粒度容易通過濾器時(shí)亦是如此。

發(fā)明人已經(jīng)確定可通過在包含蛋白質(zhì)物質(zhì)的流體過濾之前或期間處理 濾器來避免感興趣的生物產(chǎn)品(例如，蛋白質(zhì)物質(zhì))的這種意料之外的損 失。具體地，已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照即其他等同條件下未處理的膜濾器 相比，用表面活性劑預(yù)處理的膜濾器可導(dǎo)致感興趣的生物產(chǎn)品回收率得到 令人驚訝的改善。

因此，本發(fā)明提供了一種從包括大聚集體雜質(zhì)的混合物中純化生物產(chǎn) 品，如蛋白質(zhì)的方法。按照本發(fā)明，生物產(chǎn)品經(jīng)過濾通過具有截留大蛋白 質(zhì)聚集體雜質(zhì)的尺寸的合適過濾膜。用降低感興趣的生物產(chǎn)品與濾膜的結(jié) 合的表面活性劑預(yù)處理疏水性濾器。

可通過本發(fā)明過濾的生物產(chǎn)品包括抗體、血液產(chǎn)品、病毒蛋白質(zhì)和多 糖。

附圖說明

圖1顯示了在過濾通過未處理的濾器之后流感病毒的各毒株的蛋白質(zhì) 損失百分比。

圖2顯示了正通過未處理的濾器的流感病毒的各毒株的流速與時(shí)間的 變化。

圖3顯示了在用未處理的濾器過濾之前和之后流感病毒毒株的粒度分 布。

圖4顯示了相對(duì)于用未處理的濾器過濾，按照本發(fā)明的處理濾器產(chǎn)生 的回收病毒產(chǎn)率的增加。

圖5顯示了用各種磷酸鹽緩沖鹽水沖洗體積去除的聚山梨酯80(吐溫) 的量。

圖6顯示了相對(duì)于經(jīng)聚山梨酯80(吐溫)處理的濾器，用經(jīng)磷酸鹽緩 沖鹽水溶液處理的濾器過濾時(shí)病毒損失百分比。

具體實(shí)施方式

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及從大蛋白質(zhì)聚集形成的雜質(zhì)中純化感興趣 的生物產(chǎn)品的方法。因此，在一些實(shí)施方式中，提供了含有至少一種感興 趣的生物產(chǎn)品的樣品(例如，流體)中去除聚集體的方法。

按照本發(fā)明，該方法包括使用合適的膜濾器，該膜濾器已經(jīng)用表面活 性劑，例如表面活性劑溶液預(yù)處理以提供經(jīng)預(yù)處理的膜濾器。如本文中更 詳細(xì)的描述，經(jīng)預(yù)處理的膜濾器一般不在該步驟之后干燥。可任選地用合 適的緩沖液或水洗滌經(jīng)預(yù)處理的膜濾器以在過濾步驟之前從膜濾器中去除 過量(例如，未結(jié)合)的表面活性劑。一旦獲得并任選地洗滌經(jīng)預(yù)處理的 膜濾器，然后使用經(jīng)預(yù)處理的膜濾器過濾含感興趣的生物產(chǎn)品的樣品(例 如，流體樣品)。感興趣的生物產(chǎn)品通過經(jīng)預(yù)處理的膜濾器過濾并收集為 濾液。該步驟從樣品中去除不需要的大聚集體。