[發明專利]遺傳修飾動物細胞的改進方法

有效

• 申請號: 201480052400.5
• 申請日: 2014-09-23
• 公開（公告）號: CN105593362B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 約翰·R·威爾遜
• 申請（專利權）人: 威爾遜沃夫制造公司
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N5/07;C12N5/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

本發明涉及通過降低細胞和遺傳修飾劑之間的距離以提高遺傳修飾的效率和/或減少基因修飾劑的使用來遺傳修飾動物細胞的改進方法。

相關申請

本申請要求2013年9月23日提交的標題為“IMPROVED METHODS OF CELLTRANSDUCTION”的美國臨時申請No.61/881,259的權益，其整體通過引用并入本文。

本申請中引用的每個申請、專利和論文，以及每個申請、專利和論文中引用的每個文獻或參考(包括每個授權專利公訴期間；“申請引用文獻”)，未決美國專利申請10/961,814(下文中Wilson‘814)、未決美國專利申請13/475,700(下文中Vera‘700)、未決美國專利申請13/493,768(下文中Vera‘768)、未決美國專利申請11/952,848(下文中Wilson‘848)、未決美國專利申請14/313,702(下文中Welch‘702)，以及對應于和/或要求這些申請和專利中任意的優先權的每一個PCT和外國申請或專利，以及每個申請引用文獻中引用或參考的每個文獻，均明確地通過引用并入本文。

技術領域

本發明涉及通過降低細胞和遺傳修飾劑(genetic modification agent)之間的距離以提高遺傳修飾的效率和/或減少遺傳修飾劑的使用來遺傳修飾動物細胞的改進方法。

背景技術

遺傳修飾的細胞通常是指經歷了通常被稱為轉導的過程之后的經轉導細胞。可以利用多種技術進行轉導，以允許基因修飾劑進入細胞。這樣的遺傳修飾劑包括使用病毒載體、電穿孔或提高細胞滲透性的化學試劑。轉染和轉化是將遺傳物質插入細胞的常見方式。

在病毒載體的情況下，有多種使用的類型，并且這樣的類型可以包括慢病毒、逆轉錄病毒、腺病毒或者甚至納米工程物質。在電穿孔的情況下，使細胞暴露于電壓，其允許基因修飾劑(如質粒)進入細胞。主要的挑戰是提高細胞轉導的效率。效率提高可以包括增加給定細胞群中經轉導細胞的數目或者減少在遺傳上改變給定群中給定數目的細胞所需的遺傳修飾劑的量。

慢病毒提供了與細胞轉導相關的優勢和問題的很好的實例。慢病毒主要是用于向體外系統中引入基因產物的研究工具。使用高通量形式的RNA干擾技術，進行了大規模協作努力來使用慢病毒阻斷特定基因的表達。短發夾RNA(shRNA)的表達降低了特定基因的表達，因此使得研究者能夠檢查模型系統中給定基因的必要性和作用。這些研究可以是開發旨在阻斷基因產物以治療疾病的新藥的前驅。

在T細胞療法領域，新興的應用是在體外從遺傳上改變T細胞以產生嵌合抗原受體(CAR)，其賦予轉導T細胞對靶抗原的特異性，通常是對于靶抗原之單克隆抗體的特異性。以這種方式，可產生大量CAR T細胞以用于T細胞療法。CAR T細胞的轉導還可賦予細胞增強的活化信號、擴增、細胞因子的產生以及效應子功能。這種方法有很大的潛力來以意義深遠的方式改善患者特異性癌癥療法。在采集患者的T細胞后，對細胞進行遺傳工程以表達特異性針對患者腫瘤細胞上之抗原的CAR，然后輸注回患者，CAR T細胞在患者中識別并殺傷呈遞靶抗原的癌細胞。

本發明的目的是改進轉導過程，其通過增加所述過程完成后被轉導的任何給定群大小的細胞的量，減少用于所述過程中的基因修飾劑的量，和/或降低所述過程的成本和復雜性來實現，特別地，其涉及轉導T細胞。

T細胞培養和/或T細胞轉導過程中一個常見步驟是使用抗體染色的磁珠從較大的混合群中選擇目標細胞亞群。例如，可以從白細胞群中選擇細胞亞群(如干T細胞(stem Tcell))。一旦識別抗體的細胞亞群與珠結合，將整個群從裝置中移出并且使其流經磁場，由此通過磁場捕獲珠，從而從主群中分離附著至珠的細胞亞群。如果可以消除對使用流動系統分離亞群的需求以有利于在不需要液體流動的靜態裝置中進行所述過程，則將發生顯著的工藝簡化。

發明內容

公開了本發明的某些實施方案，其改進了分離細胞亞群和/或轉導動物細胞的過程。