[發(fā)明專利]新抗體純化方法和由該方法得到的抗體、以及使用了陽(yáng)離子交換基團(tuán)的新抗體純化法和由該方法得到的抗體

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480051360.2
• 申請(qǐng)日: 2014-09-16
• 公開（公告）號(hào): CN105555795A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 水口和信
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 株式會(huì)社鐘化
• 主分類號(hào): C07K1/18
• 分類號(hào): C07K1/18;C07K1/22;C07K16/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 沈雪

1.一種抗體或源自抗體的物質(zhì)的純化方法，該方法包括：使用載體1 和載體2制成連結(jié)柱或混合柱，整體地對(duì)抗體或源自抗體的物質(zhì)進(jìn)行吸附和 洗脫，所述載體1具有對(duì)抗體或源自抗體的物質(zhì)的親和配體，所述載體2具 有陽(yáng)離子交換基團(tuán)。

2.一種抗體或源自抗體的物質(zhì)的純化方法，該方法是使用了載體1和 載體2的抗體或源自抗體的物質(zhì)的純化方法，所述載體1具有對(duì)抗體或源自 抗體的物質(zhì)的親和配體，所述載體2具有陽(yáng)離子交換基團(tuán)，

該方法包括：使含有抗體或源自抗體的物質(zhì)的液體通過(guò)一體型柱或混合 型柱而將抗體或源自抗體的物質(zhì)載樣于柱中，所述一體型柱在填充有所述載 體1的柱的下游側(cè)直接連結(jié)了填充有所述載體2的柱，所述混合型柱填充有 所述載體1和載體2兩者的混合物，

接著，通過(guò)使洗脫液通過(guò)而對(duì)載樣后的抗體或源自抗體的物質(zhì)進(jìn)行洗 脫。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的純化方法，其中，在酸性pH下、且以離 子強(qiáng)度梯度進(jìn)行所述抗體或源自抗體的物質(zhì)的洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的純化方法，其中，在酸性pH下、且以離 子強(qiáng)度逐級(jí)進(jìn)行所述抗體或源自抗體的物質(zhì)的洗脫。

5.根據(jù)權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，用平衡溶液對(duì) 所述一體型柱或混合型柱進(jìn)行平衡，并對(duì)所述含有抗體或源自抗體的物質(zhì)的 溶液進(jìn)行載樣，在該載樣之后且洗脫開始之前通入清洗液，所述清洗液的離 子強(qiáng)度低于平衡溶液和含有抗體或源自抗體的物質(zhì)的溶液，且pH高于洗脫 液。

6.根據(jù)權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，用平衡溶液對(duì) 所述一體型柱或混合型柱進(jìn)行平衡，并對(duì)所述含有抗體或源自抗體的物質(zhì)的 溶液進(jìn)行載樣，在該載樣之后且洗脫開始之前，通入與平衡溶液和含有抗體 或源自抗體的物質(zhì)的溶液相比具有相同或更高的離子強(qiáng)度，且pH高于洗脫 液的清洗液，接著再通入離子強(qiáng)度低于平衡溶液和含有抗體或源自抗體的物 質(zhì)的溶液，且pH高于洗脫液的清洗液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述具有親和 配體的載體1是以蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)G、蛋白質(zhì)L或它們的類似物作為配體 的載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述具有親和 配體的載體1是以蛋白質(zhì)A或其類似物作為配體的載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述抗體或源 自抗體的物質(zhì)為免疫球蛋白G、免疫球蛋白G衍生物、或含F(xiàn)c分子。

10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述抗體或源 自抗體的物質(zhì)為Fab、scFv、雙抗體、或含有抗原結(jié)合部位的分子。

11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述具有陽(yáng) 離子交換基團(tuán)的載體2是以羧基為配體的載體。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的純化方法，其中，所述羧基源自酸性氨基 酸。

13.根據(jù)權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述抗體或 源自抗體的物質(zhì)的洗脫pH小于5.0。

14.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述載體1 對(duì)IgG的保留時(shí)間為6分鐘時(shí)的10％DBC為1mg/mL以上且100mg/mL以 下。

15.根據(jù)權(quán)利要求1～14中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述載體2 的離子交換容量為0.001mmol/mL以上且0.5mmol/mL以下。

16.根據(jù)權(quán)利要求1～15中任一項(xiàng)所述的純化方法，其中，所述載體1 的體積平均粒徑為1μm以上且1000μm以下，所述載體2的體積平均粒徑為 1μm以上且1000μm以下。