[發(fā)明專利]病毒疫苗及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480050520.1
• 申請日: 2014-09-08
• 公開（公告）號: CN105744952A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 克里什納·莫漢·瓦德雷夫;文卡特桑·拉馬沙米;普拉桑納·庫馬爾·杜夫魯
• 申請（專利權(quán)）人: 巴拉特生物技術(shù)國際有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;C12N7/02;C12N7/04;C12N7/06
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

1.一種用于預(yù)防由乙型腦炎病毒的印度科拉爾毒株引起的感染的病毒疫苗組合物，所述病毒疫苗組合物包含疫苗抗原，其中所述疫苗抗原是滅活的乙型腦炎病毒的科拉爾毒株，所述乙型腦炎病毒的科拉爾毒株適應(yīng)于在一次性生物反應(yīng)器中生長的Vero細(xì)胞以收獲活乙型腦炎病毒原液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述疫苗抗原生長在所述一次性生物反應(yīng)器中的Vero細(xì)胞中以收集活乙型腦炎病毒原液，且所述病毒原液從Vero細(xì)胞的單次培養(yǎng)和所述乙型腦炎病毒的科拉爾毒株的單次感染收獲多次(多次病毒收獲)，從至少多于一次直至五次或至少三次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述一次性生物反應(yīng)器在以下條件下被保持：50ppm-70ppm的范圍內(nèi)的溶解氧、在35.5℃至37.5℃之間的溫度范圍、在7.2至7.6的保持的pH、伴隨260rpm至280rpm的攪拌、80-150ml/min的流入速率和84-156ml/min的流出速率。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的疫苗組合物，其中所獲得的多次的病毒收獲物被進(jìn)一步純化和滅活，包括以下步驟：

(a)將病毒收獲物用0.45μ膜凈化，以將細(xì)胞碎片從所述病毒收獲物去除；

(b)將收獲物體積用300kDa膜盒濃縮至少4倍，以獲得濃縮的存留物；

(c)使步驟(b)的所濃縮的收獲物存留物通過celufine硫酸酯基質(zhì)純化，以收集包含期望的病毒、高量的鹽細(xì)胞蛋白和核酸物質(zhì)的洗脫物，其中所述基質(zhì)由纖維素支持基質(zhì)在活性基團(tuán)硫酸酯的存在下組成；

(d)使用300kDa膜盒使步驟(c)的所述洗脫物相對磷酸鹽緩沖鹽水進(jìn)行滲濾和緩沖液交換至少5-6次，以收集存留物，并將不期望的高量的鹽細(xì)胞蛋白和核酸物質(zhì)從感興趣的病毒去除，以收集純化的濃縮的病毒原液；

(e)使步驟(d)的所述純化的濃縮的病毒原液經(jīng)受0.45μ膜過濾，以消除過程中的任何污染物；

(f)將步驟(e)的純化的病毒用1:1500v/v至1:2500v/v之間的比率的福爾馬林(即1體積的福爾馬林處理2500體積的活JE)連同穩(wěn)定劑在22℃持續(xù)7天的時間段來同時穩(wěn)定化和滅活，其中所述穩(wěn)定劑由甘氨酸和山梨醇組成，或者用1:1500v/v至1:2500v/v之間的比率的β-丙內(nèi)酯(即1體積福爾馬林處理2500體積的活JE)連同穩(wěn)定劑在5℃±3℃持續(xù)7天的時間段來同時穩(wěn)定化和滅活，其中所述穩(wěn)定劑由甘氨酸和山梨醇組成；

(g)僅在福爾馬林滅活的情況中，使用300kDa膜盒使步驟(f)的滅活的純化的病毒原液相對磷酸鹽緩沖鹽水進(jìn)行滲濾和緩沖液交換至少5-6次，以去除福爾馬林；

(h)將步驟(g)的純化的滅活的病毒原液用0.22μ膜過濾，以獲得在5℃±3℃持續(xù)至少24個月至36個月不含任何污染物、適合于配制乙型腦炎疫苗的最終且穩(wěn)定的滅活的JEV原液。