[發(fā)明專利]維持FcRn結(jié)合強度的免疫球蛋白Fc綴合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480049342.0
• 申請日: 2014-07-14
• 公開（公告）號: CN105593243A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃祥淵;李鐘守;洪性熙;崔仁榮;鄭圣燁;權(quán)世昌
• 申請（專利權(quán)）人: 韓美藥品株式會社
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/46
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;趙蓉民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段綴合物，所述綴合物包括通過非肽 基連接體與具有FcRn-結(jié)合區(qū)域的免疫球蛋白Fc片段連接的生理活性多肽，并且能夠維持 免疫球蛋白Fc片段內(nèi)在結(jié)合親和力；制備該綴合物的方法、維持該綴合物對FcRn的內(nèi)在結(jié) 合親和力的方法；以及包括該綴合物的組合物，所述組合物能夠維持免疫球蛋白Fc片段對 FcRn的內(nèi)在結(jié)合親和力。

背景技術(shù)

已經(jīng)對包含與蛋白質(zhì)連接以增加蛋白質(zhì)血清半衰期的載體——如聚乙二醇聚合 物、白蛋白、脂肪酸或抗體Fc(恒定區(qū))——的蛋白質(zhì)綴合物或復(fù)合物進行了各種研究。迄今 為止已知有關(guān)此類蛋白質(zhì)綴合物或復(fù)合物的研究主要目的是增加藥物的血清半衰期以縮 短給藥間隔，從而提高患者方便性。然而，許多常規(guī)技術(shù)存在問題，如由于例如由治療性蛋 白和載體蛋白之間的非特異性結(jié)合引起的空間位阻而使治療性蛋白的活性降低。此外，在 可逆結(jié)合至血清白蛋白以增加其血清半衰期的脂肪酸綴合物的情況下，因為由于蛋白質(zhì)和 脂肪酸之間的可逆結(jié)合而無法避免腎臟清除——導(dǎo)致蛋白質(zhì)藥物的最大損失，顯著提高蛋 白質(zhì)藥物的血清半衰期是有限的。

而且，已經(jīng)做出努力以利用免疫球蛋白片段增加包括蛋白質(zhì)的生物活性物質(zhì)的半 衰期。免疫球蛋白Fc的CH2-CH3區(qū)域包括延長抗體半衰期的FcRn(保護性受體)-結(jié)合位點。 FcRn是在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的MHCI類相關(guān)蛋白質(zhì)，并且與IgG和白蛋白結(jié)合。典型地， IgG和FcRn在弱酸性pH下彼此緊密結(jié)合并且在中性pH下彼此解離。因此，當(dāng)IgG通過胞飲作 用或內(nèi)吞作用從血管進入血管內(nèi)皮細(xì)胞并進入溶酶體(pH6.0)時，其受到FcRn保護而不被 降解。當(dāng)IgG通過再循環(huán)與細(xì)胞膜融合時，其在pH7.4下與FcRn解離并且被釋放到血管中。因 為該過程，包括FcRn-結(jié)合位點的IgG1、IgG2和IgG4的體內(nèi)半衰期平均為3周，比其它蛋白質(zhì) 的體內(nèi)半衰期長。

因此，當(dāng)免疫球蛋白Fc片段與生物活性物質(zhì)連接時，可以通過FcRn-介導(dǎo)的再循環(huán) 增加生物活性物質(zhì)的半衰期。對此，有必要開發(fā)出能夠在生物活性物質(zhì)和免疫球蛋白Fc片 段連接在一起時維持免疫球蛋白Fc片段對FcRn結(jié)合親和力而不降低生物活性物質(zhì)活性的 方法。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

本發(fā)明人已作出大量努力來開發(fā)這樣的綴合物，其能夠維持免疫球蛋白Fc片段自 身對FcRn的內(nèi)在結(jié)合親和力而不降低生理活性多肽的活性，并且能夠在中性pH下容易與 FcRn解離。結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，包括通過非肽基連接體與具有FcRn-結(jié)合區(qū)域的免疫球蛋 白Fc片段連接的生理活性多肽的綴合物能夠維持免疫球蛋白Fc片段對FcRn的內(nèi)在結(jié)合親 和力，同時，能夠在7.4的中性pH下容易與FcRn解離，從而完成本發(fā)明。

技術(shù)方案

本發(fā)明的一個目的是提供包含通過非肽基連接體與包括FcRn-結(jié)合區(qū)域的免疫球 蛋白Fc片段連接的生理活性多肽的生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段綴合物，其中在pH6.0 下與FcRn結(jié)合的綴合物的量和在pH7.4下與FcRn結(jié)合的綴合物的量的結(jié)合比率在通過在用 于該綴合物的相同條件下測量免疫球蛋白Fc片段與FcRn結(jié)合的量而測定的比率的±6％范 圍內(nèi)。

本發(fā)明的另一個目的是提供包含通過非肽基連接體與包括FcRn-結(jié)合區(qū)域的免疫 球蛋白Fc片段連接的生理活性多肽的生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段綴合物，其中通過 將在pH6.0下與FcRn結(jié)合的綴合物的量和在pH7.4下與FcRn結(jié)合的綴合物的量代入下列等 式1而測定的結(jié)合比率在通過在用于該綴合物的相同條件下測量與FcRn結(jié)合的免疫球蛋白 Fc片段的量而測定的結(jié)合比率的±6％范圍內(nèi)：

等式1

結(jié)合比率(％)＝(在pH7.4下結(jié)合的量/在pH6.0下結(jié)合的量)×100。