[發明專利]登革病毒相關的基因特異性siRNA、包含該siRNA的雙鏈寡RNA分子、和包含它們的用于抑制登革病毒復制的組合物

在審

• 申請號: 201480048987.2
• 申請日: 2014-07-04
• 公開（公告）號: CN105705639A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 梁周成;金佑奭;崔順子;樸翰浯
• 申請（專利權）人: 柏業公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P31/12
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

技術領域

本發明涉及登革病毒特異性的siRNA、包含所述siRNA的雙鏈寡RNA結構，和包含它 們的用于抑制登革病毒復制的組合物，其中所述雙鏈寡RNA結構包含通過簡單共價鍵或接 頭介導的共價鍵綴合于所述雙鏈RNA(siRNA)的兩端的親水性化合物和疏水性化合物，從而 有效地遞送入細胞，且可以通過水溶液中雙鏈寡RNA結構之間的疏水相互作用轉化成納米 顆粒。所述雙鏈寡RNA結構中包括的siRNA優選為登革病毒特異性的siRNA。

而且，本發明涉及用于制備雙鏈寡RNA結構的方法，和用于抑制登革病毒復制以及 預防和治療登革病毒感染的藥物組合物，所述藥物組合物包含所述雙鏈寡RNA結構。

背景技術

登革病毒是屬于黃病毒科(Flaviviridae)的病毒，其具有單鏈RNA和直徑30nm且 顯示正極性的包膜。登革病毒是世界上最常見感染人類的疾病之一。登革熱通過蚊子叮咬 或被感染的人傳播，引起高燒和皮疹伴隨肌肉和關節疼痛，且在一些病例引起出血。感染登 革出血熱的人處于喪失他們生命的高風險。此外，人雖然對感染他們的登革病毒型有永久 免疫，但對其他的病毒型不受保護。由于該原因，對于在居住在疫區的人，所有四種類型登 革病毒的感染在他們的整個一生中都有可能發生。

據世界衛生組織估計，登革感染者超過5000萬，全球每年出現超過一百萬的登革 熱感染病人。因此，登革熱被認為是主要的公共健康問題之一，但對登革病毒的預防性疫苗 尚沒有報道。東南亞是登革熱的最大疫區，其中易發生幾個血清型登革病毒的再感染。繼發 登革感染中的登革出血熱(DHF)和登革休克綜合征(DSS)是死亡的主要原因(QiuFX等, BullWorldHealthOrgan,71:349-359,1993；TassniyomS等,Pediatrics,92:111-115, 1993)。在韓國雖然尚未爆發登革熱，但預計韓國人感染登革病毒的數量將由于與登革疫區 的貿易、出國旅行、海外居住等的擴大而增加。而且，感染機會如越野旅行和重復前往登革 疫區的增加，能夠增加被登革病毒再感染的可能性，也會增加由繼發感染而發生DHF和DSS 的風險。事實上，在韓國國立衛生研究所，從2001年至2003年6月期間對從國外回來而顯示 出懷疑為登革熱癥狀的99人進行血清學測試，發現有33人登革病毒抗體呈陽性。

登革病毒具有四個血清型且基因組大小約為11kb。登革病毒基因組翻譯為單個多 蛋白(polyprotein)，然后被宿主病毒蛋白酶切割為功能性蛋白質。在先前的疫苗策略中， 因為用多價疫苗不會引起針對四種相似的血清型的有效保護，因此抑制登革病毒復制有很 大的困難。然而，在病毒基因組的基因工程方法中，對所有4種血清型有效的疫苗的研究在 進步，一些跨國制藥公司正在進行最終的臨床試驗。通常，原發性感染不致命，但出現不同 血清型的繼發性感染時，先前形成的抗體不會構成有效的保護，而ADCC(抗體依賴性的細胞 細胞毒性)會增加病毒感染以對生命造成巨大威脅。到目前為止進行的僅有一種主要手段， 即對這樣的病人施用細胞因子。同時，用于抑制基因表達的技術在開發用于治療疾病的治 療劑和驗證靶標中是重要的工具。在這些技術中，由于發現了RNA干擾(下文稱“RNAi”)的作 用，發現RNA干擾對多種哺乳動物細胞中的序列特異性的mRNA起作用(Silenceofthe transcripts:RNAinterferenceinmedicine.J.Mol.Med.(2005)83:764-773)。當長鏈雙 鏈RNA被遞送入細胞時，遞送的雙鏈RNA轉變為小干擾RNA(下文稱“siRNA”)，所述siRNA經核 酸內切酶Dicer加工為21-23個堿基對(bp)，其中所述siRNA通過反義鏈識別和降解靶mRNA 的過程以序列特異性的方式抑制靶基因的表達(NUCLEIC-ACIDTHERAPEUTICS:BASIC PRINCIPLESANDRECENTAPPLICATIONS.NatureReviewsDrugDiscovery.2002.1,503- 514)。