[發(fā)明專利]用于PTH的純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480046603.3
• 申請日: 2014-08-21
• 公開（公告）號: CN105473610A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設計）人: 桑吉烏·庫馬爾·門迪拉塔;桑賈伊·班迪奧帕迪亞伊;阿萬尼什·庫馬爾·辛格
• 申請（專利權(quán)）人: 卡迪拉保健有限公司
• 主分類號: C07K14/635
• 分類號: C07K14/635
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11240
• 代理人: 沈敬亭;徐麗華

1.一種用于純化甲狀旁腺激素的方法，包括以下必要步驟：

(a)酶促切割；

(b)陰離子交換色譜，接著是其他合適的純化步驟

其中，能夠以任何順序進行步驟(a)和(b)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，通過重組腸激酶進行所述酶促切割。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述陰離子交換色譜是弱陰離子交換色譜。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，陰離子交換劑選自DEAE瓊脂糖、MonoQ和Q瓊脂糖XL，優(yōu)選Q瓊脂糖。

5.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的用于純化甲狀旁腺激素的方法，包括：

(a)酶促切割

(b)陰離子交換色譜；

(c)弱陽離子交換色譜；

(d)強陽離子交換色譜；

(e)陰離子交換色譜

其中

-能夠在第一陰離子交換色譜步驟之后進行酶促切割，

-能夠以任何順序進行步驟(c)至(e)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，陽離子交換劑選自SP-5PW、SP瓊脂糖、MonoS、Bio-rex70、CM瓊脂糖。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，用于強陽離子交換色譜的陽離子交換劑是SP-5PW。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，用于弱陽離子交換色譜的陽離子交換劑是CM瓊脂糖。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，進一步包括在第一陰離子交換色譜步驟之后的超濾-滲濾步驟。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中滲濾介質(zhì)選自磷酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑以及它們的組合。

11.從粗混合物中根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的用于純化甲狀旁腺激素的方法，包括以下步驟：

(a)細胞破裂；

(b)從細胞裂解物中分離包涵體團塊；

(c)溶解包涵體；

(d)通過酶促切割從融合-伴侶-蛋白-PTH復合體中分離甲狀旁腺激素；

(e)重新調(diào)節(jié)；

(f)弱陰離子交換色譜；

(g)弱陽離子交換色譜；

(h)強陽離子交換色譜；

(i)超濾/滲濾(UF/DF)；

(j)弱陰離子交換色譜；

(k)通過超濾/滲濾的緩沖劑交換；

(l)0.22μm終端過濾；

其中

-能夠在第一陰離子交換色譜步驟之后進行酶促切割

-能夠以任何順序進行步驟(g)至(l)

12.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的方法，其中，甲狀旁腺激素是重組甲狀旁腺激素。

13.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的方法，其中，甲狀旁腺激素通過切割位點與融合伴侶融合。