[發(fā)明專利]用于檢測癌前病損的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480043715.3
• 申請日: 2014-08-14
• 公開（公告）號: CN105452485A
• 公開（公告）日: 2016-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安城皖;吳泰禎
• 申請（專利權(quán)）人: 基因特力株式會(huì)社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574;C12N15/11
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 陳桉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多配體聚糖-2(syndecan-2,SDC2)基因作為CpG甲基化生物標(biāo)記物的用途，其用于檢測癌前病損，所述癌前病損對應(yīng)于結(jié)腸直腸組織的細(xì)胞增殖性病癥，所述檢測基于特定基因區(qū)域中當(dāng)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為增生性細(xì)胞時(shí)發(fā)生的異常甲基化事件。更具體而言，本發(fā)明涉及通過測量SDC2基因的特定區(qū)域的甲基化程度來早期檢測癌前病損的方法。

背景技術(shù)

即使在醫(yī)療科學(xué)發(fā)達(dá)的當(dāng)今，癌癥患者，尤其是占癌癥患者大多數(shù)的實(shí)體瘤患者(而不是血液癌癥患者)，其5年生存率低于50％。所有癌癥患者的約三分之二被診斷為處于已進(jìn)展階段，并且他們的大多數(shù)在癌癥診斷后2年內(nèi)死亡。癌癥治療中的此類不良結(jié)局不僅是由于治療方法的問題，還由于這樣一個(gè)事實(shí)：在早期診斷癌癥和精確診斷進(jìn)展的癌癥和在癌癥治療后進(jìn)行癌癥患者隨訪是不容易的。

在當(dāng)前的臨床實(shí)踐中，癌癥的診斷是通過如下方法來確診的：在獲取病史、體格檢查和臨床評估后進(jìn)行組織活檢，如果疑似癌癥的話，然后是放射成像檢測和內(nèi)窺鏡檢查。然而，通過現(xiàn)有的臨床實(shí)踐對癌癥的診斷，僅僅在癌細(xì)胞數(shù)目多于十億個(gè)且腫瘤直徑大于1cm時(shí)才是可能的。在這種情況下，據(jù)報(bào)道癌細(xì)胞已經(jīng)具有了轉(zhuǎn)移能力，并且其至少一半已經(jīng)轉(zhuǎn)移了。與此同時(shí)，用于監(jiān)測直接或間接產(chǎn)生自癌癥的物質(zhì)的腫瘤標(biāo)記物被用于癌癥治療后的癌癥監(jiān)測中，但它們在早期診斷中有局限，這是由于其多達(dá)一半甚至在已存在癌癥時(shí)都顯示為正常，并且它們甚至在不存在癌癥時(shí)也常常顯示為陽性。

癌癥的早期診斷和治療困難的原因在于癌細(xì)胞與正常細(xì)胞顯著不同，且高度復(fù)雜和可變。癌細(xì)胞大量且連續(xù)地生長，侵入周圍組織并轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)端器官，導(dǎo)致死亡。盡管有免疫機(jī)制或抗癌治療的攻擊，癌細(xì)胞仍然存活并持續(xù)進(jìn)展，并且選擇性地增殖最適于生存的細(xì)胞群。癌細(xì)胞是具有高可變度的活體，所述可變性通過大量基因的突變而發(fā)生。為了使一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘?xì)胞并進(jìn)展至臨床上可檢測的惡性腫瘤塊，必須發(fā)生大量基因的突變。因此，為了診斷和根治癌癥，必須采用基因水平的手段。

近年來，人們積極嘗試遺傳分析來診斷癌癥。最簡單的典型方法是通過PCR檢測血液中ABL:BCR融合基因的存在(白血病的遺傳特征)。該方法的精確度大于95％，并且在使用這種簡單易行的遺傳分析對慢性粒細(xì)胞性白血病進(jìn)行診斷和治療后，這種方法正在被用于評估結(jié)果和隨訪研究。然而，這種方法具有缺陷，即其僅能用于一些血液癌癥。

此外，還嘗試了另一種方法，其中通過RT-PCR和印跡法來檢測癌細(xì)胞表達(dá)的基因的存在，由此診斷血細(xì)胞中癌細(xì)胞的存在。然而，這種方法的不足之處在于其僅能用于一些癌癥，包括前列腺癌和黑色素瘤，具有高假陽性率。并且，難以對這種方法中的檢測和判讀進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，而且其實(shí)用性也是有限的(Kopreski,M.S.等,Clin.CancerRes.,5:1961,1999；Miyashiro,I.等,Clin.Chem.,47:505,2001)。

具體而言，已知癌癥患者的癌癥組織中的異常細(xì)胞通過一些過程(包括凋亡和壞死)釋放出片段化的DNA進(jìn)入血液流，并因此作為無細(xì)胞的腫瘤DNA存在于血液的血清或血漿中。實(shí)際上，已知許多癌癥患者的血液流中DNA濃度高于正常人是常見的情況。嘗試了使用癌癥特異性異常修飾的DNA區(qū)域作為標(biāo)記物用于診斷癌癥(deVosT.等,Clin.Chem.55:1337-1346；PotterN.T.等,Clin.Chem.60:9；MessaoudiS.EI.等,ClinicaChimicaActa424:222-230；MarzeseD.M.等,ExpertRev.Mol.Diagn.13(8):827-844)。

實(shí)際上，已經(jīng)積極嘗試了通過檢查血清中突變的K-Ras致癌基因、p53腫瘤抑制基因和p16基因的啟動(dòng)子甲基化、以及標(biāo)記和微衛(wèi)星(microsatellite)的不穩(wěn)定性，來診斷肺癌、頭頸癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和肝癌(Chen,X.Q.等,Clin.CancerRes.,5:2297,1999；Esteller,M.等,CancerRes.,59:67,1999；Sanchez-Cespedes,M.等,CancerRes.,60:892,2000；Sozzi,G.等,Clin.CancerRes.,5:2689,1999)。