[發明專利]新檢測方法

有效

• 申請號: 201480030302.1
• 申請日: 2014-03-28
• 公開（公告）號: CN105492907B
• 公開（公告）日: 2017-10-31
• 發明（設計）人: Y·達阿米科;G·芒努松
• 申請（專利權）人: IDL生物技術公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 左路,林曉紅

1.一種檢測樣品中選自細胞角蛋白8、18和19組成的組的至少兩種細胞角蛋白和/或其可溶性片段的方法，包括以下步驟：

-使所述樣品接觸固相，所述固相上固定有對細胞角蛋白8具有特異性的第一抗體和對細胞角蛋白18具有特異性的第二抗體，其中所述第一抗體為6D7，其由保藏號為ECACC 13031902的細胞系分泌，所述第二抗體為3F3，其由保藏號為ECACC 13031901的細胞系分泌；

-使所述樣品中的細胞角蛋白和/或其可溶性片段結合到所述第一和第二抗體從而形成復合物；

-使所述復合物接觸對細胞角蛋白8和18的二聚體具有特異性的第一標記抗體和任選的對細胞角蛋白19的第二表位具有特異性的第二標記抗體，其中所述第一標記抗體為M21，其由保藏號為ECACC 13032101的細胞系分泌，所述第二標記抗體為A53-B/A2；

-使所述標記抗體結合到所述復合物；和

-檢測結合到所述復合物的所述標記抗體。

2.根據權利要求1的方法，其中所述固相上還固定有對細胞角蛋白19的第一表位具有特異性的第三抗體，所述第三抗體由保藏號為ECACC 13031903的細胞系分泌，且使所述形成的復合物還接觸對細胞角蛋白19的第二表位具有特異性的第二標記抗體。

3.根據權利要求1的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。

4.根據權利要求1的方法，其中所述第一標記抗體對細胞角蛋白18的α-螺旋2B 2(aa 414-429)具有特異性，所述第二標記抗體對細胞角蛋白19的α-螺旋2B 2(aa 311-335)具有特異性。

5.根據權利要求1或2的方法，其中所述第一抗體對α-螺旋2B(aa 340-365)具有特異性，所述第二抗體對α-螺旋2B(aa320-350)具有特異性，所述第三抗體對α-螺旋2B(aa340-370)具有特異性。

6.根據權利要求1的方法，其中對細胞角蛋白8具有特異性的所述第一抗體在總的固定抗體的組成中占20-40％，對細胞角蛋白18具有特異性的所述第二抗體在總的固定抗體的組成中占5-15％，對細胞角蛋白19具有特異性的所述第三抗體在總的固定抗體的組成中占50-70％。

7.根據權利要求6的方法，其中對細胞角蛋白8具有特異性的所述第一抗體在總的固定抗體的組成中占30％，對細胞角蛋白18具有特異性的所述第二抗體在總的固定抗體的組成中占10％，對細胞角蛋白19具有特異性的所述第三抗體在總的固定抗體的組成中占60％。

8.根據以上任一項權利要求的方法，其中檢測樣品中的細胞角蛋白8和18和/或其可溶性片段，包括以下步驟：

-使所述樣品接觸固相，所述固相上固定有對細胞角蛋白8具有特異性的第一抗體和對細胞角蛋白18具有特異性的第二抗體；

-使所述樣品中的細胞角蛋白和/或其可溶性片段結合到所述第一和第二抗體從而形成復合物；

-使所述復合物接觸對細胞角蛋白8和18的二聚體具有特異性的第一標記抗體；

-使所述標記抗體結合到所述復合物；

-檢測結合到所述復合物的所述標記抗體。

9.根據權利要求1的方法，其中所述標記抗體用辣根過氧化物酶標記，并且通過加入能夠被所述辣根過氧化物酶轉化成可檢測物質的底物來進行檢測。

10.根據權利要求9的方法，其中所述底物被所述辣根過氧化物酶轉化為發色物質。

11.根據權利要求10的方法，其中所述底物為TMB(3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺)。

12.一種定量測定樣品中的至少兩種細胞角蛋白的可溶性片段的方法，所述細胞角蛋白選自細胞角蛋白8、18和19組成的組，所述方法包括以上任一項權利要求的方法，進一步包括以下步驟：

-將結合的對角蛋白8和18的二聚體具有特異性的第一標記抗體和對細胞角蛋白19具有特異性的第二標記抗體的量與細胞角蛋白8、18和/或19的可溶性片段的量進行定量關聯。