[發明專利]活細胞的冷凍保存

在審

• 申請號: 201480029514.8
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN105263320A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發明（設計）人: 克里斯托夫·默尼爾;皮埃爾·范卡策姆;巴奧-利安·蘇
• 申請（專利權）人: 那慕爾大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 沈敬亭;李海霞

1.一種用于低溫保存(基因修飾的)植物細胞、植物細胞器或植物組織的方法，其包括以下步驟：

-將所述植物細胞、植物細胞器或植物組織包封在包含一種或多種二氧化硅前體和一種或多種冷凍保護劑的多孔二氧化硅基質中；

-在4℃和20℃之間的溫度下溫育所獲得的混合物超過1小時的時期；

-將所得到的雜化二氧化硅凝膠轉移到在-30℃和-196℃之間的溫度下的冷凍器中。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述冷凍器處于-80℃的溫度。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述一種或多種冷凍保護劑選自由二甲基亞砜(DMSO)、糖、氨基酸、兩性離子化合物(甜菜堿)、二醇、多元醇或其混合物所組成的組。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述糖是蔗糖或海藻糖。

5.根據權利要求3所述的方法，其中所述氨基酸是脯氨酸或甘氨酸。

6.根據權利要求3所述的方法，其中所述二醇是(聚)乙二醇。

7.根據權利要求3所述的方法，其中所述多元醇選自由山梨糖醇、麥芽糖醇、甘油、赤藻糖醇、木糖醇、阿拉伯糖醇、甘露醇、乳糖醇、異麥芽糖醇或其混合物所組成的組。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中在所述二氧化硅基質中所述二氧化硅前體的濃度可以在5％和10％之間變化。

9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述一種或多種二氧化硅前體選自由聚硅酸(H₂SiO₃)_n(優選偏硅酸H₂SiO₃)、氫氧化硅、二氧化硅烷氧化物(例如原硅酸四甲酯(TMOS)、原硅酸四乙酯(TEOS)、原硅酸四丙酯(TPOS)、四(2-羥乙基)原硅酸酯(EGMS)、四(2-羥丙基)原硅酸酯(PGMS)和四(2,3-二羥丙基)原硅酸酯(GLMS))、硅酸鹽(如硅酸鈉或硅酸鉀)、二氧化硅納米顆粒、山梨醇硅烷、有機改性硅酸鹽(有機改性的二氧化硅)、三甲氧基甲基硅烷、二甲氧基二甲基硅烷、TMOS(四甲氧基硅烷)、DGS(二甘油基硅烷)，或其混合物所組成的組。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述冷凍保護劑為與所述一種或多種二氧化硅前體混合的濃度分別在0.2M和1.0M之間(蔗糖)以及1％和10％之間(DMSO)的蔗糖和DMSO。

11.一種用于植物細胞、植物細胞器或植物組織的低溫保存試劑盒，包括一種或多種二氧化硅前體和一種或多種冷凍保護劑。

12.根據權利要求10所述的試劑盒，其中所述一種或多種二氧化硅前體選自由聚硅酸(H₂SiO₃)_n(優選偏硅酸H₂SiO₃)、氫氧化硅、二氧化硅烷氧化物(例如原硅酸四甲酯(TMOS)、原硅酸四乙酯(TEOS)、原硅酸四丙酯(TPOS)、四(2-羥乙基)原硅酸酯(EGMS)、四(2-羥丙基)原硅酸酯(PGMS)和四(2,3-二羥丙基)原硅酸酯(GLMS))、硅酸鹽(如硅酸鈉或硅酸鉀)、二氧化硅納米顆粒、山梨醇硅烷、有機改性硅酸鹽(ormosils)(有機改性的二氧化硅)、三甲氧基甲基硅烷、二甲氧基二甲基硅烷、TMOS(四甲氧基硅烷)、DGS(二甘油基硅烷)，或其混合物所組成的組。

13.根據權利要求10所述的試劑盒，其中所述一種或多種冷凍保護劑選自由DMSO(二甲基亞砜)、糖、氨基酸、兩性離子化合物(甜菜堿)、二醇或多元醇或其混合物所組成的組。

14.根據權利要求12所述的試劑盒，其中所述糖是蔗糖或海藻糖。

15.根據權利要求12所述的試劑盒，其中所述氨基酸為脯氨酸或甘氨酸。

16.根據權利要求12所述的試劑盒，其中所述二醇是(聚)乙二醇。

17.根據權利要求12所述的試劑盒，其中所述多元醇選自由山梨糖醇、麥芽糖醇、甘油、赤藻糖醇、木糖醇、阿拉伯糖醇、甘露醇、乳糖醇、異麥芽糖醇或其混合物所組成的組。