[發明專利]蛋白純化的新穎方法有效
| 申請號： | 201480028322.5 | 申請日： | 2014-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN105247036B | 公開（公告）日： | 2019-04-02 |
| 發明（設計）人： | 斯蒂芬·霍利 | 申請（專利權）人： | 安迅生物制藥公司 |
| 主分類號： | C12N1/00 | 分類號： | C12N1/00;C12N1/06 |
| 代理公司： | 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262 | 代理人： | 鄭霞 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蛋白 純化 新穎 方法 | ||
1.一種用于從表達DAS181的大腸桿菌(Escherichia coli)細胞釋放DAS181的方法，所述方法包括：
(a)提供表達DAS181的細胞的培養物；
(b1)使所述培養物與濃度在10mM至100mM范圍內的磷酸鈉接觸；保持包含添加的磷酸鈉的所述培養物至少10分鐘；使所述包含添加的磷酸鈉的所述培養物與濃度在75mM至200mM范圍內的EDTA接觸；或
(b2)使所述培養物與濃度在10mM至100mM范圍內的磷酸鈉和與濃度在75mM至200mM范圍內的EDTA接觸；
(c)使包含添加的磷酸鈉和添加的EDTA的所述培養物保持至少10分鐘；
(d)將所述包含添加的磷酸鈉和添加的EDTA的所述培養物的pH調整至范圍在5至8的pH；并使所述包含添加的磷酸鈉和添加的EDTA的所述培養物保持至少15分鐘；
(e)使所述包含添加的磷酸鈉和添加的EDTA的所述培養物與濃度在5％至8％范圍內的Triton X-100和濃度在0.05％至0.20％范圍內的SDS接觸；
(f)使所述包含添加的磷酸鈉、添加的EDTA、添加的Triton X-100和添加的SDS的所述培養物保持至少1小時；
(g)使所述包含添加的磷酸鈉、添加的EDTA、添加的Triton X-100和添加的SDS的所述培養物的溫度降低；
(h)使所述包含添加的磷酸鈉、添加的EDTA、添加的Triton X-100和添加的SDS的所述培養物與0.5％的聚乙烯亞胺接觸；
(i)使所述包含添加的磷酸鈉、添加的EDTA、添加的Triton X-100、添加的SDS和添加的聚乙烯亞胺的所述培養物保持至少1小時，以及
(j)使所述包含添加的磷酸鈉、添加的EDTA、添加的Triton X-100、添加的SDS和添加的聚乙烯亞胺的所述培養物經歷除去大部分的細胞碎片的方法，由此提供包含DAS181的組合物；
其中，所述方法不包括(k)機械破碎所述細胞，(l)除去基本上所有的培養基，和(m)添加降解細胞壁材料的酶。
2.如權利要求1所述的方法，其中步驟(c)是至少20分鐘。
3.如權利要求1所述的方法，其中步驟(d)是至少30分鐘。
4.如權利要求1所述的方法，其中步驟(d)是至少45分鐘。
5.如權利要求1所述的方法，其中步驟(d)是至少1小時。
6.如權利要求1所述的方法，其中步驟(d)是在30分鐘和1小時之間。
7.如權利要求1所述的方法，其中步驟(i)是2-8小時。
8.如權利要求1所述的方法，其中步驟(g)需要將所述溫度降低到低于25℃。
9.如權利要求1所述的方法，其中步驟(h)在20℃-25℃發生。
10.如權利要求1所述的方法，其中步驟(h)在21℃-22℃發生。
11.如權利要求1所述的方法，其中步驟(h)在22℃發生。
12.如權利要求1所述的方法，所述方法還包括從包含感興趣的蛋白的組合物純化感興趣的蛋白。
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