[發(fā)明專利]使用蛋白質溶液治療膠原蛋白缺損的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201480028053.2
• 申請日: 2014-03-11
• 公開（公告）號: CN105358162A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發(fā)明（設計）人: A·毛圖什卡;K·歐肖內西;J·E·伍德爾-馬伊
• 申請（專利權）人: 拜歐米特生物制劑有限責任公司
• 主分類號: A61K35/14
• 分類號: A61K35/14;A61K38/20;A61K38/19;A61P19/02
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路

1.用于在哺乳動物對象中的膠原蛋白缺損位置刺激軟骨細胞產生的方法，包括將包含選自IL-1ra、sTNF-R1、sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1和sIL-1RII的至少兩種蛋白質的組合物施用到所述位置，其中各蛋白質在所述組合物中的濃度大于所述蛋白質在正常血液中的濃度。

2.權利要求1的方法，其中所述來源于血液的組合物是所述對象自體的。

3.權利要求1的方法，其中所述來源于血液的組合物包含

(a)至少約10,000pg/ml的IL1-ra；

(b)至少約1,200pg/ml的sTNF-RI；和

(c)蛋白質，選自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物，其中所述蛋白質的濃度高于正常血液中所述蛋白質的基線濃度。

4.用于在哺乳動物對象中的膠原蛋白缺損位置刺激軟骨細胞產生的方法，包括將來源于血液的組合物施用到所述位置，所述組合物包含

(a)白介素-1受體拮抗劑(IL-1ra)，濃度是正常血液中的IL-1ra濃度的至少3倍；

(b)可溶性組織壞死因子-r1(sTNF-r1)，濃度是正常血液中的IL-1ra濃度的至少2倍；

(c)細胞因子生成細胞，濃度是正常血液中的細胞因子生成細胞濃度的至少2倍；和

(d)血小板，濃度是正常血液中的血小板濃度的至少2倍。

5.權利要求4的方法，其中IL-1ra的濃度為約10,000pg/ml-約50,000pg/ml。

6.權利要求4的方法，其中TNF-r1的濃度為約1,200pg/ml-約4,000pg/ml。

7.權利要求6的方法，其中sTNF-r1的濃度為約2000pg/ml或更高。

8.權利要求4的方法，其中所述組合物進一步包含選自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物的蛋白質，其中所述蛋白質在所述組合物中的濃度大于所述蛋白質在正常血液中的濃度。

9.權利要求4的方法，其中所述組合物進一步包含濃縮的骨髓抽吸物。

10.用于在哺乳動物對象中的膠原蛋白缺損位置刺激軟骨細胞產生的方法，包括：

a)從所述對象獲得細胞因子細胞懸液；

(b)分級分離所述液體以產生包含白介素-1受體拮抗劑的自體的蛋白質溶液；

(c)將所述自體的蛋白質溶液施用到所述對象中的缺損位置。

11.權利要求10的方法，其中所述細胞因子細胞懸液包含全血、骨髓抽吸物、脂肪組織、尿液、其部分和其混合物。

12.權利要求11的方法，其中所述液體是富血小板血漿。

13.權利要求12的方法，其中所述分級分離包括將血液置于容器，可操作以將所述血液分離為兩或多個部分的分離器；以及離心所述分離器以產生富血小板血漿部分。

14.權利要求13的方法，其中所述分級分離進一步包括將所述富血小板血漿與聚丙烯酰胺珠接觸，并將所述富血小板血漿與所述聚丙烯酰胺珠分離以形成所述自體的蛋白質溶液。

15.權利要求10的方法，其中所述分級分離包括：

(1)將包含全血、骨髓抽吸物或兩者的組織和抗凝劑加樣到置有浮標的管內，其中所述浮標的密度使得浮標能在管內組織離心后達到平衡位置，所述平衡位置在包含細胞因子生成細胞的第一部分和第二部分之間，第二部分的細胞因子生成細胞濃度大于第一部分的細胞因子生成細胞濃度；

(2)對管進行離心，從而所述浮標界定第一部分與第二部分之間的界面；和

(3)收集第二部分；

(4)將所述第二部分加樣到包含固相提取材料的濃縮器組件，溫育與固相提取材料接觸的第二部分；和

(5)旋轉濃縮器組件，采用的離心速度能分離固相提取材料和富含白介素-1受體拮抗劑的溶液，所述溶液的白介素-1受體拮抗劑濃度大于全血。