[發明專利]使用蛋白質溶液治療膠原蛋白缺損的方法在審

申請號：	201480028053.2	申請日：	2014-03-11
公開（公告）號：	CN105358162A	公開（公告）日：	2016-02-24
發明（設計）人：	A·毛圖什卡;K·歐肖內西;J·E·伍德爾-馬伊	申請（專利權）人：	拜歐米特生物制劑有限責任公司
主分類號：	A61K35/14	分類號：	A61K35/14;A61K38/20;A61K38/19;A61P19/02
代理公司：	永新專利商標代理有限公司 72002	代理人：	左路
地址：	美國印***	國省代碼：	美國;US
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摘要：
搜索關鍵詞：	使用蛋白質溶液治療膠原蛋白缺損方法
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【說明書】：

背景技術

本技術涉及在哺乳動物對象中的膠原蛋白缺損位置刺激軟骨細胞的方法。特別地，方法包括使用含細胞因子的溶液，包括源自血液和其它組織的這種溶液。

軟骨細胞是產生和維持組成軟骨的軟骨基質的細胞。膠原蛋白是動物中最豐富的蛋白質，存在于各種組織，包括皮膚、結締組織、軟骨、骨、血管和椎間盤。有各種各樣的膠原蛋白相關疾病，由包含膠原蛋白的組織的疾病以及創傷造成。疾病可以由影響軟骨細胞產生膠原蛋白的遺傳缺陷或營養缺陷造成。一些膠原蛋白疾病與自身免疫疾病相關，如類風濕性關節炎、狼瘡和系統性硬化，所述自身免疫疾病在膠原蛋白產生后將其破壞。這類疾病可能是使人虛弱的且疼痛的。

軟骨由膠原蛋白纖維組成。因此，膠原蛋白疾病可以影響關節和其他組織結構中的軟骨的組成和功能。軟骨缺損可以呈現為軟骨表面的洞或撕裂，且可以由磨損、創傷或疾病造成。由于軟骨自我修復能力低，即使是小的軟骨缺損，如果不治療的話，能妨礙人或其他哺乳動物無痛移動的能力，并且能導致關節表面退化。傳統的軟骨缺損治療包括用關節鏡手術修整軟骨表面的缺損，或用縫合修復缺損。較新地，軟骨缺損的治療包括收貨軟骨細胞，然后對其進行培養，并移植回到軟骨缺損以重生軟骨。

然而，很多這樣的治療可能存在副作用，并且可能有受限制的長期利用，因為潛在的病癥變得嚴重。因此需要開發治療軟骨缺損和其它膠原蛋白缺損的新療法，特別是改進功效和降低副作用的療法。

發明內容

本技術提供用于刺激膠原蛋白產生，包括刺激軟骨細胞產生的方法和治療性組合物。方法包括在哺乳動物對象中的膠原蛋白缺損位置刺激軟骨細胞產生，包括將血液來源的組合物施用到所述位置，所述組合物包含選自IL-1ra、sTNF-R1、sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1和sIL-1RII的至少兩種蛋白質，其中各蛋白質在所述組合物中的濃度大于所述蛋白質在正常血液中的濃度。例如，組合物可以包含：

(a)至少約10,000pg/ml的IL1-ra；

(b)至少約1,200pg/ml的sTNF-RI；和

(c)蛋白質，選自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物，其中所述蛋白質的濃度高于正常血液中所述蛋白質的基線濃度。

在一些實施方式中，所述組合物進一步包含選自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物的蛋白質，其中所述蛋白質在所述組合物中的濃度大于所述蛋白質在正常血液中的濃度。所述組合物可以包含細胞因子生成細胞、血小板和其組合。

本技術還提供制備用于在哺乳動物對象中刺激軟骨細胞產物的組合物的方法，包括：

(a)從所述對象獲得細胞因子細胞懸液；

(b)分級分離所述液體以產生包含白介素-1受體拮抗劑的自體的蛋白質溶液；

(c)將所述自體的蛋白質溶液施用到所述對象中的膠原蛋白缺損的位置。

所述細胞因子細胞懸液可以包括全血、骨髓抽吸物、脂肪組織、尿液、其部分和其混合物。例如，分級分離可以包括將血液置于容器，可操作以將所述血液分離為兩或多個部分的分離器；以及離心所述分離器以產生富血小板血漿部分。所述富血小板血漿可以與固相提取材料如聚丙烯酰胺珠接觸，以形成所述自體的蛋白質溶液。

附圖說明

圖1的框圖描述生成細胞因子組合物的方法；

圖2是分級分離裝置的圖；

圖3A和3B顯示在離心之前(圖3A)和之后(圖3B)激活樣品產生抗炎性細胞因子的裝置；

圖4是產生血凝塊的裝置的圖；

圖5是能產生細胞因子組合物的單一裝置的圖；

對應的參考數字指示附圖數個視圖中的對應部分。應指出，本文所列圖意在舉例說明本技術材料、組合物、裝置和方法的一般特征，以用于描述某些實施方式的目的。這些圖不一定精確反映任意給定實施方式的特征，且不必定用于完整定義或限制本技術范圍內的特定實施方式。