[發明專利]預測胃癌的復發的方法

在審

• 申請號: 201480025811.5
• 申請日: 2014-05-02
• 公開（公告）號: CN105247074A
• 公開（公告）日: 2016-01-13
• 發明（設計）人: 深川剛生;佐佐木博己;福島雅夫;間森千春
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人國立癌癥研究中心;住友電木株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/09
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;謝弘

技術領域

本發明涉及預測胃癌的復發的方法和用于該方法的胃癌復發預測用試劑盒。

背景技術

近年來，正在開發使用DNA芯片技術的代替細胞診斷的復發預測法。

專利文獻1中記載了根據TFF1、TFF2、FABP1、CK20、MUC2、CEA、TACSTD1、MASPIN、PRSS4、GW112和ACTB的合計11種基因的表達水平的測定進行胃癌的復發預測。根據專利文獻1的技術，利用從對象的癌患者采集的試樣，通過PCR對對象的基因的一部分區域進行擴增，使所得到的PCR擴增物與將合計11種探針配置于固相上的陣列雜交，從所得到的結果，能夠獲得用于均一且準確預測胃癌的復發的數據。

另外，非專利文獻1中記載了關于CK20、FABP1、TFF1和MASPIN的微陣列檢測與免疫細胞化學結果非常一致。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2006-223303號公報

非專利文獻

非專利文獻1：AnnalsofSurgicalOncology，14，1694-1702，2007

發明內容

發明所要解決的課題

然而，在上述文獻的技術中，由于規定臨界值，需要與檢查對象檢體同時使用早期胃癌檢體進行測定。

例如，在專利文獻1的技術中，以早期胃癌病例39例的最大亮度值作為判定值，對于得到高于該判定值的亮度值的基因，判斷為“有顯著的表達”。

另外，非專利文獻1的技術中，將早期胃癌樣品39例的MAXSD(maximumvalueplusstandarddeviation)或AVG2SD(averagevalueplustwiceormorepositivemarkers)設定為臨界值，作為結果，顯示后者是有效的。

因此，在上述文獻的技術中，如果每個檢查中不使用將近40例的早期胃癌的病例，就難以進行可靠的胃癌的復發預測，有時并不是實用的方法。

本發明是鑒于上述情況作出的，提供即使不與檢查對象檢體同時使用早期胃癌檢體進行測定，也能夠準確地預測胃癌的復發的簡便且實用的方法。

用于解決課題的方法

根據本發明，提供一種預測胃癌的復發的方法，其特征在于，包括：

通過聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction，PCR)對胃癌試樣(腹腔內清洗液)中所含的胃癌細胞特異性的標記(marker)基因的至少一部分區域進行擴增并標記，獲得上述標記基因的標記片段的步驟；

使上述標記基因的上述標記片段與在規定的位置分別固定有檢測上述標記基因的至少一個標記基因檢測用探針和來自植物的陰性對照探針的載體接觸，使上述標記基因檢測用探針與上述標記基因的上述標記片段雜交的步驟；

在雜交的上述步驟之后，獲得與固定有上述標記基因檢測用探針的位置和固定有上述陰性對照探針的位置處的上述標記基因的上述標記片段的量相關的測定量的步驟；和

以與固定有上述陰性對照探針的位置處的上述標記片段的量相關的測定量為基準，在與固定有上述標記基因檢測用探針的位置處的上述標記片段的量相關的測定量超過第一閾值時，判定上述胃癌試樣為陽性的步驟，

在判定上述胃癌試樣為陽性的上述步驟中，使用由CEA、TFF1、FABP1、CK20和MUC2構成的5種上述標記基因，判定上述胃癌試樣的陽性。

另外，根據本發明，提供一種用于預測胃癌的復發的胃癌復發預測用試劑盒，

其具備檢測胃癌細胞特異性的標記基因的至少一個標記基因檢測用探針和陰性對照探針分別固定于規定位置的載體，

上述標記基因為由CEA、TFF1、FABP1、CK20和MUC2構成的5種，

通過聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction，PCR)對胃癌試樣中所含的上述標記基因的至少一部分區域進行擴增并標記，使獲得的上述標記基因的標記片段與上述標記基因檢測用探針雜交，在雜交后，獲得與固定有上述標記基因檢測用探針的位置和固定有上述陰性對照探針的位置處的上述標記基因的上述標記片段的量相關的測定量，以與固定有上述陰性對照探針的位置處的上述標記基因的上述標記片段的量相關的測定量為基準，在與固定有上述標記基因檢測用探針的位置處的上述標記基因的上述標記片段的量相關的測定量超過第一閾值時，判定上述胃癌試樣為陽性，由此預測胃癌的復發。