[發明專利]無血清細胞培養基

在審

• 申請號: 201480023485.4
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN105143444A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發明（設計）人: S·奧紹迪;A·約翰遜;S·勞倫斯
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 韓威威

技術領域

本發明涉及用于培養細胞和用于產生重組蛋白的培養基。本發明特別地涉及培養用于產生蛋白質生物治療藥的重組CHO細胞的無血清培養基。

背景技術

包含血清或蛋白質水解物組分(即，蛋白胨和胰蛋白胨)的細胞培養基具有用于從培養的細胞生產重組蛋白的漫長歷史。這些組分含有生長因子和廣泛類型的有益于細胞生長和培養的其他未表征要素。但是，它們還含有減少生長或否則不利影響重組蛋白生產的未表征要素。它們也可能是不受歡迎的潛在變異源。盡管它們有缺點，但是使用血清和水解物的益處已經超過某些缺點，并且它們已經廣泛使用于許多細胞培養應用中。

人生物治療藥(生物藥物)通常在哺乳動物細胞培養物、尤其CHO細胞培養物中產生。對于制造人用生物藥物而言，未表征或部分表征的組分在這些細胞培養物中的存在高度不利。使用這類未表征的或部分表征的組分不僅引入生產和監管不相符性，它還帶來病毒或真菌性感染生產培養物的可能性。

減少藥品產生和組成的批次間變異性是選擇培養過程中的另一個重要因素。血清、水解物和其他未確定的要素在生物制藥生產批次的產率、組成和質量方面引入變異性。培養基要素的質量和純度還可能影響產率，因為藥物滴度經常部分地依賴于維持特定的養分平衡。在養分的相對量在一個培養基批次與另一個培養基批次間變動的情況下，藥物產率可能變動并且這種變異可能不可接受或不經濟。

使用含血清或基于水解物的培養基引入下游加工難題。培養物中所需生物制藥的濃度通常在克/升級別。培養基中血清和水解物的存在可能增加超過10g/L的未表征肽和蛋白質，后者必須在后續加工步驟中移除。血清和水解物還可能在培養基中引入金屬和其他微量元素數量的變異性。從培養基消除血清和水解物因此消除這些變異和生產和加工原料藥的潛在障礙。

連同其他，使用無血清培養基和無水解物培養基的益處包括降低成本、減少藥物批次間變異和最大限度降低從未確定和未精制的組分引入外源因子的風險。另外，在培養基在成批生產之間確定和均勻的情況下，可能最大限度地減少針對當前培養基而檢驗新培養基批次的資格確認性運行。因此，本領域需要用于培養哺乳動物細胞的培養基，其中該培養基是化學確定的并且不含血清和水解物，或是無血清的并且含有可管理的低水平水解物，然而允許健康和穩健的細胞生長和維持以及生物藥物原料藥的高滴度產生。

發明簡述

發明人已經令人驚訝地發現在具有或沒有腐胺的情況下在不含血清的細胞培養基(“OS”培養基)中包含鳥氨酸增加了細胞生存力和密度、減少細胞加倍時間并允許這些細胞產生高滴度蛋白質。發明人也已經發現含有少量或痕量蛋白質水解物或化學上確定(即，不含蛋白質水解物)的OS培養基尤其提供恢復的細胞生存力和密度、細胞加倍時間和高滴度蛋白質產量。

在一個方面，本發明提供無血清并且包含至少0.09mM±0.014mM鳥氨酸的細胞培養基。在一個實施方案中，鳥氨酸在培養基中以0.09±0.014mM至0.9±0.14mM的濃度存在，如0.09±0.014mM、0.3±0.05mM、0.6±0.09mM或0.9±0.14mM鳥氨酸。在一些實施方案中，培養基還含有至少0.20±0.03mM腐胺。在一些實施方案中，額外的腐胺以0.20±0.03mM至0.714±0.11mM的濃度存在，如0.20±0.03mM、0.35±0.06mM或0.714±0.11mM腐胺。在一些實施方案中，培養基含有≤7.5g/L水解物。在一些實施方案中，培養基不含任何水解物。

在一個實施方案中，培養基含有化學確定的基礎培養基，如訂制制劑或市售基礎培養基。在一個實施方案中，完整培養基是化學確定的，不含血清并且不含水解物。

在一些實施方案中，培養基在其可用濃度(即，1X)含有至少40±6mM或至少70±10.5mM的氨基酸或氨基酸鹽混合物。在一個實施方案中，培養基含有至少40mM氨基酸混合物。在這個或另一個實施方案中，培養基含有至少70mM氨基酸混合物。在一個實施方案中，氨基酸的混合物(值得注意的例外是谷氨酰胺，它可以作為現場使用添加物再次添加至培養基)含有丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。