[發明專利]D?阿洛酮糖3?表異構酶突變體、重組載體和微生物、生產D?阿洛酮糖的方法和反應器有效
| 申請號： | 201480023014.3 | 申請日： | 2014-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN105164255B | 公開（公告）日： | 2018-03-20 |
| 發明（設計）人： | 曺永門;金昌謙;李白碩 | 申請（專利權）人： | CJ第一制糖株式會社 |
| 主分類號： | C12N9/90 | 分類號： | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/77;C12N1/21 |
| 代理公司： | 北京同立鈞成知識產權代理有限公司11205 | 代理人： | 陶敏,臧建明 |
| 地址： | 韓國首爾市中區*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 阿洛酮糖表異構酶 突變體 通過 使用 制備 阿洛酮糖 方法 | ||
1.一種D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體，其為衍生自SEQ ID NO:1所示的根癌土壤桿菌的野生型D-阿洛酮糖3-表異構酶的氨基酸序列的位置77處的谷氨酸經脯氨酸取代所衍生的蛋白質。
2.根據權利要求1所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體，其中所述氨基酸序列的位置33處的異亮氨酸經由以下所構成的族群中選出的氨基酸取代：亮氨酸、半胱氨酸以及纈氨酸，或所述氨基酸序列的位置213處的絲氨酸經半胱氨酸取代。
3.根據權利要求1所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體，其中所述氨基酸序列的位置33處的異亮氨酸經亮氨酸取代，并且所述氨基酸序列的位置213處的絲氨酸經半胱氨酸取代。
4.一種多核苷酸，其編碼根據權利要求1到3中任一項所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體。
5.一種重組載體，其包括編碼根據權利要求1到3中任一項所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體的基因。
6.一種重組微生物，其經轉型以生產根據權利要求1到3中任一項所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體。
7.根據權利要求6所述的重組微生物，其中所述微生物是谷氨酸棒狀桿菌。
8.一種生產D-阿洛酮糖的方法，其包括：
提供給D-果糖以根據權利要求1到3中任一項所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體或根據權利要求6到7中任一項所述的經轉型以生產所述D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體的重組微生物，由此引起酶反應；以及
在提純所述酶反應的產物后回收D-阿洛酮糖。
9.根據權利要求8所述的生產D-阿洛酮糖的方法，其中在所述酶反應中進一步添加金屬離子。
10.根據權利要求9所述的生產D-阿洛酮糖的方法，其中所述金屬是錳。
11.根據權利要求9所述的生產D-阿洛酮糖的方法，其中所述金屬離子以0.01mM到5mM的濃度添加。
12.一種用于生產D-阿洛酮糖的固定反應器，其包括填充有載體的管柱，根據權利要求1到3中任一項所述的D-阿洛酮糖3-表異構酶突變體或根據權利要求6所述的重組微生物固定到所述載體。
13.一種生產D-阿洛酮糖的方法，其通過將D-果糖溶液引入到根據權利要求12所述的用于生產D-阿洛酮糖的固定反應器中來進行。
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