[發(fā)明專利]類病斑表型的抑制子SLM1

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480018854.0
• 申請(qǐng)日: 2014-01-30
• 公開（公告）號(hào): CN105143455A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J.S.賈奎斯;J.季;G.喬哈;A.倫納德;李柏林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 納幕爾杜邦公司;普渡研究基金會(huì)
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C07K14/415;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 鄒雪梅;李炳愛

1.一種制備內(nèi)源Slm1表達(dá)減少的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括：

a.將包含分離的多核苷酸的重組構(gòu)建體引入到可再生的植物細(xì)胞中，所述分離的多核苷酸可操作地連接至啟動(dòng)子，其中所述多核苷酸序列的表達(dá)降低內(nèi)源Slm1的表達(dá)；

b.在步驟(a)之后，由所述可再生的植物細(xì)胞再生出轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體；以及

c.選擇(b)的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物包含所述重組構(gòu)建體且在與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對(duì)照植物進(jìn)行比較時(shí)表現(xiàn)出Slm1表達(dá)的減少。

2.一種制備內(nèi)源Slm1表達(dá)減少的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括：

a.將包含分離的多核苷酸的重組DNA構(gòu)建體引入到可再生的植物細(xì)胞中，所述分離的多核苷酸以有義或反義取向可操作地連接至在植物中有功能的啟動(dòng)子，其中所述多核苷酸包含：

i.SEQIDNO：47、48、50或51的核苷酸序列；

ii基于ClustalW比對(duì)方法，在與SEQIDNO：47、48、50或51進(jìn)行比較時(shí)具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；

iii.SEQIDNO：47、48、50或51的至少100個(gè)連續(xù)的核苷酸的核苷酸序列；

iv.能夠在嚴(yán)格條件下與(i)的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；或

v.經(jīng)修飾的植物miRNA前體，其中所述前體已經(jīng)經(jīng)修飾以用設(shè)計(jì)用于產(chǎn)生指向SEQIDNO：47、48、50或51的miRNA的序列替換所述miRNA編碼區(qū)；

b.在步驟(a)之后再生轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述轉(zhuǎn)基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體；以及

c.選擇(b)的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物包含所述重組DNA構(gòu)建體且在與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對(duì)照植物進(jìn)行比較時(shí)表現(xiàn)出Slm1表達(dá)的減少。

3.一種制備農(nóng)學(xué)特性改變的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括：

a.將包含分離的多核苷酸的重組DNA構(gòu)建體引入到可再生的植物細(xì)胞中，所述分離的多核苷酸可操作地連接至至少一種調(diào)控序列，其中所述多核苷酸編碼多肽的片段或變體，基于ClustalW比對(duì)方法，在與SEQIDNO：49、52或73進(jìn)行比較時(shí)，所述多肽具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中所述片段或所述變體賦予所述可再生的植物細(xì)胞中的顯性負(fù)表型；

b.在步驟(a)之后，由所述可再生的植物細(xì)胞再生出轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體；以及

c.選擇(b)的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物包含所述重組DNA構(gòu)建體且在與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對(duì)照植物進(jìn)行比較時(shí)表現(xiàn)出至少一種農(nóng)學(xué)特性的改變，所述農(nóng)學(xué)特性選自：非生物脅迫耐受性、早衰、綠度、生物量、產(chǎn)量、耐旱性、低氮耐受性、根倒伏、收獲指數(shù)、莖倒伏、植物高度、穗高、穗長(zhǎng)、耐鹽性、早期幼苗活力和在低溫脅迫下的出苗。

4.一種鑒定slm1的等位基因的方法，所述方法包括以下步驟：

a.對(duì)突變體玉米植物的群體進(jìn)行遺傳篩選；

b.鑒定一種或多種表現(xiàn)出slm1表型的突變體玉米植物；以及

c.從具有slm1表型的突變體玉米植物鑒定slm1等位基因。

5.一種制備農(nóng)學(xué)特性改變的轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括以下步驟：

a.將包含slm1等位基因的第一植物與包含重組DNA構(gòu)建體的第二植物雜交，所述重組DNA構(gòu)建體包含可操作地連接至啟動(dòng)子的分離的多核苷酸；

b.篩選來自步驟(a)的植物群體；以及

c.選擇包含下列的植物：(i)步驟(a)的重組DNA構(gòu)建體；(ii)slm1表型；和(iii)在與包含所述重組DNA構(gòu)建體但不包含slm1表型的對(duì)照植物進(jìn)行比較時(shí)，至少一種農(nóng)學(xué)特性的改變，所述農(nóng)學(xué)特性選自：非生物脅迫耐受性、早衰、綠度、生物量、產(chǎn)量、耐旱性、低氮耐受性、根倒伏、收獲指數(shù)、莖倒伏、植物高度、穗高、穗長(zhǎng)、耐鹽性、早期幼苗活力和在低溫脅迫下的出苗。

6.一種植物，所述植物中內(nèi)源Slm1基因的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照植物是降低的。

7.一種由權(quán)利要求5所述的方法制備的植物或種子。

8.一種制備權(quán)利要求6所述的植物的方法，所述方法包括以下步驟：

a.將突變引入到所述內(nèi)源Slm1基因中；以及

b.檢測(cè)所述突變。